重组促红细胞生成素缓释微球的剂型优化研究
Formulation Optimization of Recombinant Human Erythropoietin Sustained-release Microspheres
本研究旨在考察缓释微球制备条件对促红细胞生成素(EPO)的自然形态、体内药效等的影响,全面优化EPO缓释微球的制剂工艺.蛋白缓释经30多年的研究还未有成功的产品问世,主要是因为蛋白分子脆弱的高级结构在制剂过程中变性、失活甚至导致有害的免疫反应.其中制备过程中的水-油界面和水-气界面是公认的造成蛋白聚集的原因.本人所在课题组开发了一个独特的材料体系-"水相-水相乳液",可以在避免接触亲水-疏水界面的前提下将结构脆弱的蛋白药物包封于可耐受苛刻条件的多糖微粒中,从而使蛋白的自然形态在制剂过程中得到保护.本项目中,我们将这一技术用于EPO缓释剂型的制备与优化.含有165个氨基酸、30400Da的分子量的EPO是目前所有重组蛋白药物中全球销售额最大,用于治疗肾病、癌症化疗以及HIV感染引起的多种原因的贫血的药物.EPO同时也是最易发生聚集、变性失活和严重抗体反应的蛋白.实现EPO的缓释不但有可观的临床需求,也可充分证明上述缓释技术的可行性.本研究采用促UT-7细胞生长法对EPO缓释微球体外释放影响因素进行了考察,并根据BALB/C小鼠体内药效对EPO微球进行了剂型优化,优化后的EPO缓释微球体内药效学作用显著,与剂量相当的水针剂型相比,在大大减少给药次数的同时表现了相当的药效.SEC-HPLC法考察了微球中回收的EPO几乎没有发生聚集.采用优化后的释放介质柠檬酸盐缓冲液考察了体外释放情况,ELISA法检测结果显示优化后的缓释微球在体外释放实验中连续20天释放出了EPO,突释及不完全释放情况也得到了较好的控制.SEC-HPLC、体内药效学实验、体外释放实验都一致的证明了优化后的缓释微球在抑制EPO聚集、保持蛋白活性上有很大的优势,并能持续不断的释放出EPO产生药效.这一研究的完成将不仅解决EPO这个全球市场最大的处方药的长效缓释问题,而且将为一大批同类重组蛋白药物的缓释建立新的通用性方法.
- 作者：
- 郭梅燕
- 学位授予单位：
- 上海交通大学
- 专业名称：
- 药剂学
- 授予学位：
- 硕士
- 学位年度：
- 2009年
- 导师姓名：
- 金拓
- 中图分类号：
- R94
- 关键词：
- 促红细胞生成素；微球；聚集；体内活性
- EPO；MICROSPHERES；AGGREGATES；IN VIVO ACTIVITY