食品中邻苯二甲酸二丙酯和邻苯二甲酸二丁酯的高灵敏免疫分析方法研究
Researches on Highly Sensitive Immunoassays for the Detection of Dipropyl Phthalate and Dibutvl Phthalate in Foodstuff
2011年台湾食品的塑化剂风波,引起消费者对邻苯二甲酸酯(PAEs)的密切关注.PAEs被广泛地应用于工业生产和消费品市场中,在产品的生产、使用、处理过程中,PAEs可能会随之进入环境和食品中.PAEs是一类环境激素,能通过产生类似激素的作用干扰器官的正常生长和发育.因此,邻苯二甲酸酯的研究具有重要的现实意义.近年来的免疫分析方法具有高特异性、线性范围宽和简单快速等优点.本论文建立了三种免疫分析技术检测食品及其塑料包装袋中的痕量邻苯二甲酸二丙酯(DPrP)和邻苯二甲酸二丁酯(DBP),主要内容如下:一、采用重氮化法,将半抗原4-氨基邻苯二甲酸二丙酯(DPrAP)与载体蛋白质(BSA,OVA)结合制备了人工抗原.将半抗原DPrAP与BSA结合物作为免疫抗原,免疫动物获得终点效价为1:128,000的多克隆抗体,抗体的交叉反应率均低于13%.至此,我们制备并获得了高特异性的抗体.然后将半抗原DPrAP与OVA结合物作为包被抗原,进行免疫分析实验.二、用HRP标记邻苯二甲酸二丙酯全抗原(DPrAP-OVA),采用抗体包被酶标板,建立了直接竞争酶联免疫分析法(dc-ELISA)测定食品包装材料中的DPrP.在多功能酶标仪上检测490nm处的吸光度值.在最优化实验条件下,最低检测限为0.01ng/mL,线性范围为0.01-16ng/mL.对四种样品中的DPrP含量进行了检测,回收率在85.9%-109.4%之间.三、利用化学发光反应,采用HRP标记全抗原(DPrAP-OVA)为检测探针,抗体包被酶标板,建立了直接竞争增强化学发光酶联免疫分析法(CL-ELISA)快速测定食品中的DPrP.在多功能酶标仪上测定化学发光强度值.在最优化实验条件下,最低检测限为0.03ng/mL,线性范围为0.03-500ng/mL.对六种样品中的DPrP含量进行了检测,回收率在86.4%-119.5%之间.四、采用一种新型的荧光标记物氟硼二吡咯衍生物(BODIPY)标记抗体,抗原包被酶标板,建立了直接竞争荧光免疫分析法(dc-FIA)测定食品中的DBP.在多功能酶标仪上测定激发波长为485nm,发射波长为528nm时的荧光强度.在最优化实验条件下,最低检测限为0.001ng/mL,线性范围为5.7*10-3-1.1*103ng/mL.对三种样品中的DBP含量进行了检测,回收率在87.0-105.0%之间.
- 作者：
- 胡玉嵘
- 学位授予单位：
- 安徽师范大学
- 专业名称：
- 分析化学
- 授予学位：
- 硕士
- 学位年度：
- 2012年
- 导师姓名：
- 张明翠
- 中图分类号：
- TS207.3
- 关键词：
- 邻苯二甲酸酯；免疫分析法；食品样品；塑料包装袋
- Phthalate esters；Immunoassay；Foodstuff；Plastic foodcontact materials