男男性接触人群艾滋病急性期血液和精液中HIV-1基因特点及生物学特性对比研究
目的:
我们欲对MSM人群艾滋病患者急性期外周血及精液中HIV-1的env序列、辅助受体的使用等生物学特性及基因特征进行研究,以期发现我国MSM人群艾滋病患者急性期HIV-1的致病特点、变异规律及传播特征等.
方法:
入组急性HIV感染者7例,并留取血液和精液标本,将留取的标本处理为本实验所需的PBMC、血浆、精液细胞和精浆四种标本.利用巢式PCR分别扩增标本中的DNA和RNA,得到所需的C2V5区序列.之后将扩增所得的C2V5序列连接至T载体,后导入JM109感受态细胞,LB固体培养基培养,分别挑取单克隆等步骤后送测序,每位患者的每种样本送10个测序.测序结果利用ContigExpress和BioEdit软件进行校正及比对,之后一方面用Mega6软件构建系统进化树,另一方面利用Geno2pheno和PSSM系统预测细胞嗜性,了解急性期病毒的基因特点及生物学特性.
结果:
(1)本实验收集到的28份样本中一共有26份为阳性,阳性率为93%(26/28).
(2)Pt1除了P1-9外,各病毒进化上分布比较中,而S1-1、S1-9与标准株CN54-C距离较近.Pt2中C2-1、C2-9与标准株HXB2-B距离较近,其余病毒分布比较集中.Pt3、Pt4、Pt5中标准株和个各病毒分布都比较分散.Pt6只有PBMC和血浆标本,PBMC中的病毒和血浆中的病毒各自都比较集中.Pt7各病毒分布比较集中,但是与标准株距离较远.
(3)血浆和精浆中病毒的变异要大于PBMC和精液细胞中病毒的变异;而精液中病毒的变异则大于血液中病毒的变异.
(4)在得到的260份序列中,预测的亚型以AE亚型为主,共123份,占47.3%;其次是B亚型,有73份,占28.1%;最少的是BC亚型,有64份,占24.6%.
(5) PBMC、血浆、精浆及精液细胞中的病毒细胞嗜性以CCR5为主,偶有以CXCR4为辅助受体的病毒.
(6)7例病人中主要的顶端四肽类型为GPGR(72.0%)、GPGQ(27.1%),总共占比为99.1%.PBMC及血浆标本中只出现了GPGR及GPGQ两种类型,而精液细胞及精浆中,除了上述两种类型外,还出现了GPER和GPGS.
结论:
不同患者不同标本各病毒的进化情况有明显的差别,而且辅助受体的利用、顶端四肽及电荷数也有明显的不同.
- 作者：
- 陈广磊
- 学位授予单位：
- 首都医科大学
- 专业名称：
- 内科学(传染病)
- 授予学位：
- 硕士
- 学位年度：
- 2015年
- 导师姓名：
- 吴昊
- 中图分类号：
- R512.910.2
- 关键词：
- 艾滋病；发病机制；男男性接触人群；HIV--1基因；生物学特性
-