鸡传染性贫血病毒VP1和VP2基因的表达和免疫原性研究
鸡传染性贫血(chicken infectious anemia,CIA)又称蓝翅病、出血性综合征和贫血性皮炎综合征等,是由圆环病毒科鸡传染性贫血病毒(CIAV)引起的以雏鸡再生障碍性贫血和全身性淋巴组织萎缩为主要特征的免疫抑制病.CIAV在MSB1细胞中病毒滴度较低,而通过鸡胚传代获得的病毒量也不高,使CIA灭活疫苗的生产成本很高,难以在养鸡业大量推广应用.CIAV活疫苗由于存在安全风险,也未推广应用.故近年来,基因工程疫苗研制已成为CIAV研究的重点领域之一.
为探索制备鸡传染性贫血病毒重组蛋白亚单位疫苗的可行性,本研究利用Bac-to-Bac杆状病毒表达系统对鸡传染性贫血病毒VP1、VP2基因进行了克隆表达,构建三组重组转移载体:pFastBacHTA-VP1及pFastBacHTA-VP2; pFastBacHTA-VP1-IRES-VP2; pFastBacDual-VP1-VP2,将它们分别转化DH10Bac感受态细胞得到相应的重组表达载体,转染昆虫细胞Sf21获得含有VP1、VP2基因的重组杆状病毒vBac-VP1、vBac-VP2、vBac-VP1-IRES-VP2、vBac-VP1-VP2,利用三组重组杆状病毒分别感染悬浮培养的Sf21细胞表达重组蛋白,即vBac-VP1与vBac-VP2共感染Sf21细胞、vBac-VP1-IRES-VP2和vBac-VP1-VP2分别独立感染Sf21细胞.SDS-PAGE及Western-blot结果证明,VP1、VP2基因在昆虫细胞中得到了表达.将重组蛋白制备油乳剂灭活苗免疫SPF鸡进行蛋白免疫原性研究,动物试验进一步证实,重组蛋白免疫SPF鸡可产生高滴度的ELISA抗体,提示重组杆状病毒表达的VP1、VP2蛋白具有良好的免疫原性,其中,vBac-VP1与vBac-VP2共感染Sf21细胞和vBac-VP1-IRES-VP2独立感染Sf21细胞所表达蛋白的免疫效果接近,而vBac-VP1-VP2感染细胞所表达蛋白的免疫效果最佳.本研究为CIAV亚单位疫苗的开发奠定了良好的基础,具有较好的应用前景.
- 作者：
- 徐微
- 学位授予单位：
- 中国兽医药品监察所
- 专业名称：
- 预防兽医学
- 授予学位：
- 硕士
- 学位年度：
- 2015年
- 导师姓名：
- 李慧姣
- 中图分类号：
- S858.31；S852.65
- 关键词：
- 鸡传染性贫血病毒；VP1基因；VP2基因；基因表达；免疫原性
- chicken infectious anemia virus； VP1； VP2； baculovirus expression； immunogenicity