小峰熊蜂卵黄原蛋白受体cDNA克隆及表达特性分析
Cloning of Vitellogenin receptor cDNA and expression analysis in bumble bee(Bombus hypocrita)
卵黄原蛋白受体(Vitellogenin receptor,VgR)是一种介导卵黄原蛋白(Vitellogenin, Vg)进入卵母细胞的大分子膜蛋白,广泛分布于卵母细胞表面,它属于低密度脂蛋白家族(LDLR),具有LDLR典型的结构区特征,对动物的卵黄发生及卵母细胞的生成起到至关重要的作用.本研究利用RT-PCR和RACE技术克隆了小峰熊蜂VgR基因,应用半定量和荧光定量PCR分析了VgR基因的表达特性,并对其进行高级结构预测,取得了一些重要的进展,丰富了熊蜂分子生物学研究的内容,为小峰熊蜂人工开发利用的奠定了理论基础.本研究主要得到以下结果: 1)克隆了小峰熊蜂VgR基因的全长cDNA克隆,共5517bp,包括一个长度为63个核苷酸的5'UTR(非编码区),3'UTR非编码区序列147个核苷酸. 2)利用VgR基因对小峰熊蜂系统进化进行分析,结果显示,小峰熊蜂B.hypocrita与西方蜜蜂A.mellifera亲缘关系最近,与红火蚁S.invicta、丽蝇金小蜂N.vitripennis相对较远,这些种昆虫聚为一分支,属于膜翅目. 3)利用生物信息学软件对小峰熊蜂VgR基因进行分析,显示其编码1759个氨基酸,其中第1到第27个氨基酸为信号肽,1644到1666个氨基酸为跨膜螺旋,分子量预测值为198.131KDa;等电点PI为5.9,其保守结构域含有12个LDLa、5个EGF、2个EGF-CA、10个LY结构域. 4)半定量RT-PCR研究结果表明,VgR基因在小峰熊蜂蜂王的头、胸、腹、中肠、卵巢都有表达,但表达量存在明显的差异,VgR主要在腹部和卵巢表达,头、胸、中肠表达量很低. 5)荧光定量PCR分析表明,小峰熊蜂蜂王该基因的表达量极显著大于其它虫态(P0.05),雄蜂与幼虫期差异也不显著(P>0.05); 产卵工蜂的VgR基因表达量远远大于未产卵工蜂(P??
- 作者：
- 汪明明
- 学位授予单位：
- 云南农业大学
- 专业名称：
- 特种经济动物饲养
- 授予学位：
- 硕士
- 学位年度：
- 2010年
- 导师姓名：
- 吴杰
- 关键词：
- 小峰熊蜂(Bombus hypocrita)；卵黄原蛋白受体；基因克隆；表达
- bumblebee (Bombus hypocrita)；vitellogenin receptor；cloning；Expression character