新疆南部地方品种绵羊KAP13.3和KRT17基因的表达分析
【目的】本研究旨在对KAP13.3和KRT17基因在和田羊和卡拉库尔羊中进行初步的探究,为后续开展基因调控蛋白,改善南疆地方品种绵羊羊毛品质打下基础。【方法】本试验提取和田羊和卡拉库尔羊的总RNA,反转录获得模板c DNA;（1）用实时荧光定量PCR的方法对KAP13.3和KRT17基因在和田羊和卡拉库尔羊中表达量的差异进行分析;（2）设计KAP13.3和KRT17基因的原核引物进行PCR,胶回收产物连接p MD19-T载体,构建重组克隆质粒p MD19-T-KAP13.3和p MD19-T-KRT17,与pET-28a载体连接构建原核重组表达质粒pET-28a-KAP13.3和pET-28a-KRT17,在构建的原核表达系统中通过IPTG诱导表达蛋白,对蛋白进行Western Blot的检测;（3）设计KAP13.3和KRT17基因的真核引物,PCR克隆目的基因,与表达载体pEGFP-N1连接构建真核重组表达质粒pEGFP-N1-KAP13.3和pEGFP-N1-KRT17,将其转染哺乳动物HEK293细胞,观察荧光,Western Blot对蛋白进行检测分析。【结果】（1）KAP13.3基因在平原型和田羊和山区型和田羊之间表达差异显著（P＜0.05）,在平原型和田羊和卡拉库尔羊之间表达差异不显著（P＞0.05）,在山区型和田羊和卡拉库尔羊之间表达差异显著（P＜0.05）。KRT17基因在平原型和田羊和山区型和田羊之间表达差异显著（P＜0.05）,在平原型和田羊和卡拉库尔羊之间表达差异显著（P＜0.05）,在山区型和田羊和卡拉库尔羊之间表达差异不显著（P＞0.05）;（2）KAP13.3基因原核表达蛋白约为17.27 KDa;KRT17基因原核表达蛋白约为48.62 KDa;（3）KAP13.3基因真核表达蛋白约为46.09 KDa;KRT17基因真核表达蛋白约为77.76 KDa。【结论】（1）KAP13.3基因在山区型和田羊中表达量最多,平原型和田羊和卡拉库尔羊中表达量相差不大。KRT17基因在山区型和田羊和卡拉库尔羊中表达量相差不大,在平原型和田羊中表达量最少;（2）KAP13.3和KRT17基因在和田羊和卡拉库尔羊中构建的原核表达系统能够表达出目的蛋白;（3）KAP13.3和KRT17基因构建的真核重组表达质粒转染HEK293细胞观察到绿色荧光,并且在和田羊和卡拉库尔羊中构建的真核表达系统中表达出蛋白。
- 作者：
- 梁玫岩
- 学位授予单位：
- 塔里木大学
- 授予学位：
- 硕士
- 学位年度：
- 2021年
- 导师姓名：
- 李树伟
- 中图分类号：
- S826
- 关键词：
- 绵羊；KAP13.3；KRT17；荧光定量PCR；原核表达；真核表达
-
- 基金项目：
- 国家自然科学基金项目“角蛋白IFs、KAPs基因对和田羊次级毛囊密度的影响及雄激素对其调剂作用”的部分研究成果（项目编号:31560685）课题主持人:李树伟 教授（塔里木大学）