2种裂腹鱼类肾和尾鳍细胞系的建立及盐碱度对该细胞系增殖的影响
塔里木裂腹鱼（Schizothorax biddulphi）是国家二级保护鱼类,宽口裂腹鱼（Schizothorax eurystomus）是塔里木河水系的珍稀物种,被列为新疆保护鱼类。目前尚未见其肾组织和尾鳍细胞系建立的报道。因此,建立2种珍稀濒危裂腹鱼类的细胞系并进行耐盐碱实验,对2种鱼类的种质保存及相关研究具有重要理论与实践意义。本研究采用组织块法和胰酶消化法,初步建立了塔里木裂腹鱼肾细胞系（BIM14）和尾鳍细胞系（BICF1）,宽口裂腹鱼肾细胞系（EUM10）和尾鳍细胞系（EUCF2）。采用MTT法分析NaCl盐度和NaHCO3碱度对四种细胞系增殖的影响并分析盐碱度对肾细胞和尾鳍细胞增殖影响的差异性。本研究旨在为合理开发利用2种裂腹鱼遗传资源和保护其种质资源提供一定的科学依据。主要结果如下:1塔里木裂腹鱼肾细胞系的建立及盐碱度对其增殖的影响BIM14悬浮培养传至60代;最适培养液为DME/F12;最适FBS浓度为20%;最适温度为25℃。第10代BIM14的群体倍增时间为16.80 h,呈“S”型生长。第6代BIM14液氮冻存180 d后复苏有（91.13±0.72）%的细胞具有活性并可增殖传代。第10代BIM14线粒体16sr RNA测序结果JQ844133.1的一致率为99.91%,从分子水平证明BIM14来自塔里木裂腹鱼。NaCl盐度6‰BIM14增殖最高。NaHCO3碱度6 g/L BIM14增殖最高。BIM14增殖随盐碱度增加呈先升高后下降的趋势。2塔里木裂腹鱼尾鳍细胞系的建立及盐碱度对其增殖的影响BICF1悬浮培养传至45代;最适培养液为DME/F12;最适FBS浓度为20%;最适温度为25℃。第10代BICF1的群体倍增时间为28.11 h,呈“S”型生长。第6代BICF1液氮冻存180 d后复苏有（87.85±0.66）%的细胞具有活性并可增殖传代。第10代BICF1线粒体16sr RNA测序结果与JQ844133.1的一致率为100%,从分子水平证明BICF1来自于塔里木裂腹鱼。NaCl盐度6‰时BICF1增殖最高。NaHCO3碱度6 g/L时BICF1增殖最高。细胞增殖随盐碱度增加呈现先升高后下降的趋势。盐碱度对BIM14和BICF1的相对增殖的影响无差异。3宽口裂腹鱼肾细胞系的建立及盐碱度对其增殖的影响EUM10悬浮培养传至60代;最适培养液为DME/F12;最适FBS浓度为20%;最适温度为25℃。第10代EUM10的群体倍增时间为23.26 h,呈“S”型生长。第6代EUM10液氮冻存180 d后复苏有（91.91±0.59）%的细胞具有活性并可增殖传代。第10代EUM10线粒体16sr RNA测序结果与NC036933.1的一致率为99.81%,从分子水平证明EUM10来自宽口裂腹鱼。NaCl盐度8‰时EUM10增殖最高。NaHCO3碱度7 g/L时EUM10增殖最高;EUM10增殖随盐碱度增加呈现先升高后下降的趋势。4宽口裂腹鱼尾鳍细胞系的建立及盐碱度对其增殖的影响EUCF2悬浮培养传至45代;最适培养液为DME/F12;最适FBS浓度为20%;最适温度为25℃。第10代EUCF2的群体倍增时间为24.94 h,呈“S”型生长。第6代EUCF2液氮冻存180 d后复苏有（88.72±0.99）%的细胞具有活性并可增殖传代。第10代EUCF2线粒体16sr RNA测序结果与NC036933.1的一致率为99.91%,从分子水平证明EUCF2来自宽口裂腹鱼。NaCl盐度8‰时EUCF2增殖最高。NaHCO3碱度7 g/L时EUCF2增殖最高;EUCF2增殖随盐碱度增加呈现先升高后下降的趋势。盐碱度对EUM10和EUCF2的相对增殖的影响无差异。
- 作者：
- 代金彩
- 学位授予单位：
- 塔里木大学
- 授予学位：
- 硕士
- 学位年度：
- 2021年
- 导师姓名：
- 聂竹兰
- 中图分类号：
- S917.4
- 关键词：
- 塔里木裂腹鱼；宽口裂腹鱼；肾组织；尾鳍组织；细胞培养
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- 基金项目：
- 国家自然科学基金项目“生境破碎化对塔里木裂腹鱼形态结构及遗传多样性的影响”（项目编号:31560721）课题主持人:聂竹兰教授%“新疆兵团塔里木畜牧科技重点实验室开放课题”（项目编号:HS201712Z）课题主持人:聂竹兰教授（塔里木大学）