HGF和c-Met基因在马鹿茸组织创伤修复及再发育过程中的表达特征研究
鹿茸的周期性完全再生能力是其他哺乳动物器官所不具备的,在再生医学和生物医学被认为是适合的模型。鹿茸的生长与再生能力主要是基于干细胞的分裂,在创伤条件下,其微环境变化对鹿茸干细胞的影响可能是促进鹿茸再生及快速生长发育的重要原因。HGF/c-Met信号通路可在非炎症条件介导干细胞靶向分布,研究表明HGF、c-Met基因在组织损伤、创伤愈合等过程中起到重要作用。本研究利用分子生物学技术克隆获取塔里木马鹿茸HGF基因全长序列,通过实时荧光定量和免疫组化试验,检测创伤鹿茸组织修复及再发育过程中HGF与c-Met基因的表达,分析确定HGF与c-Met基因对鹿茸组织修复的影响,为鹿茸再生作用机制和哺乳动物组织创伤修复提供理论补充。试验利用RACE技术获得塔里木马鹿茸的HGF基因全长序列2461 bp,ORF为2193 bp,编码730个氨基酸,5′UTR为156 bp,3′UTR为112 bp。通过序列比对同源性分析结果显示:塔里木马鹿与牛（Bos taurus）;山羊（Capra hircus）;中国水牛（Bubalus bubalis）;绵羊（Ovis aries）;单峰骆驼（Camelus dromedarius）;野猪（Capra hircus）;狗（Canis lupus familiaris）;白鼬（Mustela erminea）;大熊猫（Mustela erminea）;猎豹（Acinonyx jubatus）;进行比对,同源性分别为97.93%,97.83%,97.80%,97.72%,95.72%,94.98%,94.44%,94.25%,94.11%,93.83%,塔里木马鹿HGF基因与牛同源性最高,且构建进化树发现塔里木马鹿与牛亲缘关系较近。通过qRT-PCR技术检测了HGF和c-Met基因在损伤与健康塔里木马鹿茸组织中的表达,结果显示两基因在茸皮、间充质、软骨和骨组织中表达趋势一致,其中在茸皮和骨组织的表达量极显著高于间充质和软骨组织（P＜0.01）,但在软骨和间充质组织中表达量低,且差异不显著（P＞0.05）;与健康鹿茸组织相比,HGF和c-Met基因在损伤茸茸皮组织中的表达量极显著降低（P＜0.01）,而在损伤茸间充质组织表达量极显著增加（P＜0.01）,在损伤茸软骨和骨组织表达量没有显著差异（P＞0.05）;HGF和c-Met基因随鹿茸组织修复进程表达量逐渐增加,且差异显著（P＜0.05）。试验通过免疫组化检测了HGF和c-Met在损伤与健康塔里木马鹿茸不同组织中的蛋白表达情况,分析发现两基因在损伤茸茸皮组织中阳性反应明显减弱,在损伤茸骨组织中没有明显差异,在间充质和软骨组织中阳性反应较弱。综上所述,HGF和c-Met基因在损伤茸间充质组织中表达量均极显著高于健康茸组织。初步推测HGF和c-Met基因可诱导鹿茸间充质干细胞的增殖和分化,对损伤后塔里木马鹿茸的修复及再发育有促进作用。
- 作者：
- 芮雪
- 学位授予单位：
- 塔里木大学
- 授予学位：
- 硕士
- 学位年度：
- 2021年
- 导师姓名：
- 韩春梅
- 中图分类号：
- S825
- 关键词：
- 塔里木马鹿茸；肝细胞生长因子（HGF）；原癌基因（c-Met）；RACE；表达特征
-
- 基金项目：
- 国家自然科学基金项目“创伤微环境HGF/c-met信号对鹿茸间充质干细胞增殖、迁移与分化的调控机制”的部分研究成果（项目编号:31860629）课题主持人:韩春梅教授（塔里木大学）