新疆阿克苏部分地区MDV的感染情况调查及野毒株筛选与分析
鸡马立克氏病毒（Marek’s disease virus,MDV）是一种可以引发鸡出现肿瘤性疾病的禽疱疹病毒,该病毒主要有三个血清型,感染鸡并致病的只有血型I型,又命名为禽疱疹病毒2型（Gallid h erpesvirus2,Ga HV-2）。从1909年发现此病以来,尚无治疗特效药,只能依靠疫苗免疫来防控此病。在CVI988疫苗出现后此病的预防和控制取得了一定的效果,但该疫苗的保护率不能达到100%,M D疫苗免疫属于非清除性免疫,不能阻止野毒株的感染,导致鸡在感染野毒株后野毒和疫苗毒长期存在同一机体,促使MDV的使野毒株毒力增强。因此对禽场MDV的监测仍然不能放松警惕,针对MDV不同基因的特点,对MDV的meq、pp38和132 bp重复序列致病基因进行检测,时刻监测马立克氏病毒野毒株毒力变化,为防控本病提供基础数据。为了解新疆阿克苏部分地区鸡感染MD的情况,在2021-2022年间采取肉鸡和蛋鸡场共16个厂区455份样品（羽毛毛髓和组织脏器）进行检测,使用鸡马立克荧光定量核酸检测试剂盒筛选出365份阳性样品。参考中华人民共和国国家标准MD诊断技术（GB/T 18643-2021）合成meq和132 b p重复序列引物对365份阳性样品进行野毒株和疫苗毒鉴别诊断,其中疫苗毒297份和野毒株2份。结果显示在此次采集的455样品中,采集到疫苗毒297份,占总数（297/455）的65.27%;野毒株2份,占总数（2/455）的0.44%;不携带MDV样本156份,占据总数（156/455）的34.29%。在此次455份样品检测中不携带MDV样品和疫苗毒样品共计453份,表明在该地区MD疫苗免疫效果良好且未流行。为了研究MD对鸡内脏器官的影响,对野毒株检测阳性的2只鸡肝脏样品制备病理切片,镜检观察显示肝脏组织均出现小到中等大小的淋巴细胞浸润,肝脏细胞周围有大量多形性淋巴细胞,为典型的MD病理变化。为了探究阿克苏地区MD野毒株的毒力特征,将分离到的2株野毒株命名为XJAKS2022-1和X JASU2022-2,并使用meq、pp38和132 bp重复序列特异性引物对2株野毒株进行特异性扩增,均扩增到meq、pp38和132 bp重复序列基因片段,大小分别为1020 bp、820 bp和314 bp。将meq和pp38克隆鉴定后测序,使用Meg Align软件对pp38和国内外9株毒株进行核苷酸同源性分析,均在100%-99.99%,符合强毒株pp38基因较为稳定的特点。之后又对2株毒株meq的核苷酸和氨基酸同国内外15株毒株进行比对,进行基因位点和同源性分析并构建亲缘关系进化树:发现meq核苷酸和中国毒株同源性在99.7%-99.1%,和美国株同源性在98.6%-98.5%;氨基酸和中国毒株同源性在95.95%-93.8%,美国同源性在93.3%-92.6%,XJAKS2022-1和XJASU2022-2毒株和中国同源性较高,同美国同源性较低;在基因位点分析中,XJAKS2022-1毒株在77位E、80位（D-Y）、115位（V-A）、139位（T-A）、176位（P-R）和217位（P-A）出现基因位点突变,XJASU2022-2毒株在77位出现E-D突变,之前的中国流行毒株未见该突变位点,该突变位点的变化对MD野毒毒力的影响还有待研究。XJASU2022-2毒株其余突变位点和XJAKS2022-1毒株一致。2株毒株在152-155位、191-194位和232-235位均出现了连续的4个脯氨酸（pppp）,符合中国流行毒株有3个ppp p特点,在亲缘关进化树中得到2株毒株和中国流行毒株亲缘关系较近,和美国亲缘关系较远;XJ AKS2022-1和XJASU2022-2毒株和疫苗毒基因位点分析后,575-577位发现有疫苗毒缺失3个碱基（CAC）,在176位和217位出现PRPP和PAPP突变,多出的3个碱基（CAC）与176位和217位的突变是MDV强毒株的标志。根据以上分析结果显示在新疆阿克苏地区分离到的2株毒株XJA KS2022-1和XJASU2022-2为中国流行强毒株。
- 作者：
- 李虎
- 学位授予单位：
- 塔里木大学
- 授予学位：
- 硕士
- 学位年度：
- 2022年
- 导师姓名：
- 李莲瑞
- 中图分类号：
- S858.31
- 关键词：
- 马立克氏病毒；荧光定量检测；meq基因；pp38基因；野毒株
-