当归补血汤对高脂饮食大鼠睾丸损伤的保护作用
目的:本研究建立高脂饮食（high fat diet,HFD）大鼠损伤模型,同时给予当归补血汤进行干预,探讨其对高脂饮食致睾丸损伤的保护作用,进一步研究Akt/Gsk3β信号通路在当归补血汤保护HFD大鼠睾丸损伤的机制,为防治高脂诱导的睾丸损伤提供新的思路和理论依据。方法:将50只SPF级雄性Wistar大鼠（100-120 g）随机分为正常对照组（Con组）、高脂饮食组（HFD组）、当归补血汤低剂量组（HFD+DBDL组）、当归补血汤高剂量组（HFD+DBDH组）和罗格列酮对照组（HFD+RGZ组）,每组10只。Con组给予标准普通饲料喂养,其余各组给予高脂饲料喂养,不限制饮水。HFD+DBDL组、HFD+DBDH组分别给予灌胃当归补血汤药液6 g·kg·d-1、12g·kg·d-1,HFD+RGZ组给予灌胃罗格列酮混悬液(4 mg·kg·d-1),而Con组和HFD组等容量灌胃生理盐水,连续灌胃12周后,取大鼠完整睾丸组织,进行附睾尾部精子计数和精子活力测定。检测睾丸组织中丙二醛（malondialdehyde,MDA）和超氧化物歧化酶（superoxide dismutase,SOD）的变化。留取左侧睾丸固定后进行苏木精伊红染色法（hematoxylin-eosin staining,HE）观察睾丸显微结构改变,原位末端转移酶标记染色法（Td T-mediated DUTP nick end labeling,TUNEL）观察睾丸组织的凋亡情况。Western Blot法测定睾丸组织中凋亡相关蛋白Bax、Bcl-2;焦亡相关蛋白NALP3、Caspase-1、IL-1β、IL-18;自噬相关蛋白Beclin-1、LC3B以及Akt/Gsk3β信号通路蛋白表达水平。结果:HFD组大鼠精子总数和精子活力值明显低于Con组,且睾丸组织中MDA含量升高,SOD活力降低。HE染色结果观察到HFD组大鼠睾丸曲细精管萎缩、变性以及生精上皮脱落,TUNEL法检测HFD组大鼠睾丸内凋亡小体增多,凋亡率上升明显,与Con组相比具有统计学意义（P＜0.05）。当归补血汤低、高剂量给药后皆可提升精子活力及精子总数至正常水平,同时降低MDA含量和升高SOD活力,保护睾丸组织结构,抑制睾丸组织凋亡小体的生成,降低凋亡率。Western blot结果显示:（1）HFD组大鼠睾丸组织中NALP3、Caspase-1、IL-1β、IL-18蛋白表达均显著高于Con组（P＜0.05）,当归补血汤呈剂量依赖降低焦亡蛋白水平表达（P＜0.05）。（2）自噬相关蛋白Beclin-1、LC3B蛋白表达以及凋亡蛋白Bax/Bcl-2相对表达率较Con组均明显上升（P＜0.05）,当归补血汤给药后均下调了Beclin-1、LC3B、Bax/Bcl-2蛋白表达（P＜0.05）。（3）HFD组p-Akt/Akt、p-Gsk3β/Gsk3β蛋白表达比例显著降低,与Con组相比差异具有统计学意义（P＜0.05）。当归补血汤呈剂量依赖性逆转了p-Akt/Akt、p-Gsk3β/Gsk3β蛋白表达比例（P＜0.05）。结论:当归补血汤对高脂饮食导致的大鼠睾丸损伤具有保护作用,其机制可能与恢复睾丸形态结构和生殖功能,同时可激活Akt/Gsk3β信号通路,抗氧化,抑制睾丸细胞凋亡、焦亡和调控自噬水平有关。
- 作者：
- 邱鹏
- 学位授予单位：
- 湖北科技学院
- 授予学位：
- 硕士
- 学位年度：
- 2021年
- 导师姓名：
- 查文良；孔东波
- 中图分类号：
- R285.5
- 关键词：
- 高脂饮食；当归补血汤；睾丸；细胞焦亡；自噬
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