木犀草素对棕榈酸诱导H9c2心肌细胞损伤的保护作用
目的:本研究使用0.2mmol·L-1棕榈酸（PAlmitate acid,PA）损伤H9c2心肌细胞,在细胞水平上建立脂毒性心肌损伤模型,探讨木犀草素减轻心肌脂毒性损害与AMPK/m TOR/p70S6K通路之间的关系。方法:高脂刺激心肌细胞建立脂毒性损伤模型,给予0.2mmol·L-1PA刺激H9c2心肌细胞24 h,使用PA预处理1h后再加15 mmol·L-1木犀草素联合处理24h,按此方法将实验组分为正常组、PA组、木犀草素组。CCK8法评定细胞活力;用试剂盒检测细胞内氧化应激水平,测定超氧化物歧化酶（superoxide dismutase,SOD）活性和丙二醛（malonaldehyde,MDA）含量;DHE、Annexin V-FITC/PI染色检测细胞内活性氧（reactive oxygen species,ROS）水平和细胞凋亡情况、JC-1检测细胞内线粒体膜电位（mitochondrial membrane potential,MMP）的变化变化;Western blot法检测AMPK/m TOR/p70S6K通路蛋白及凋亡相关蛋白Bax、Bcl-2、cleaved caspase-3表达;实时荧光定量PCR法检测AMPK、m TOR、p70S6K m RNA表达水平。结果:（1）与正常组相比,用0.2 mmol·L-1PA刺激H9c2心肌细胞24 h,细胞活力显著下降（P＜0.01）;细胞内SOD水平下降,MDA水平显著上升（P＜0.05）,细胞内ROS水平增高（P＜0.01）,细胞凋亡明显,线粒体膜电位水平下降（P＜0.05）;凋亡相关蛋白Bax、cleaved caspase-3表达增加,Bcl-2表达降低（P＜0.05或P＜0.01）;AMPK m RNA和蛋白表达减少,m TOR、p70S6K m RNA和蛋白表达增多（P＜0.05或P＜0.01）。（2）分别加入5μmol·L-1、10μmol·L-1,15μmol·L-1,20μmol·L-1木犀草素预处理1 h后,与PA组相比,细胞存活率有所提高。而使用15μmol·L-1LU处理后,细胞活力增加最明显（P＜0.01）;LU处理逆转了PA诱导的细胞损害,使细胞内MDA活性降低,SOD水平升高,MMP显著增加（P＜0.05或P＜0.01）,抑制细胞凋亡;同时下调细胞内Bax、cleaved caspase-3的表达,上调Bcl-2蛋白表达（P＜0.05）;激活AMPK,使其m RNA水平和蛋白表达增加,抑制m TOR、p70S6K m RNA和蛋白表达（P＜0.05或P＜0.01）。结论:LU可缓解0.2mmol·L-1PA诱导的H9c2细胞损伤,减轻氧化应激,抑制细胞凋亡,其保护作用的发生作用可能与AMPK/m TOR/p70S6K信号通路有关。
- 作者：
- 项云
- 学位授予单位：
- 湖北科技学院
- 授予学位：
- 硕士
- 学位年度：
- 2023年
- 导师姓名：
- 鲍翠玉；甘受益
- 中图分类号：
- R542.2；R587.2
- 关键词：
- 木犀草素；高脂；H9c2心肌细胞；AMPK；mTOR；p70S6K
-