黄精中主要药效成分的质量评价及药代动力学研究
明确黄精中多糖组成及辐照前后黄酮的含量变化,研究黄精黄酮提取物在大鼠体内的代谢过程。黄精与玉竹样品经除酯后提取,所得的多糖进行盐酸水解,PABA衍生,最后采用高效液相色谱荧光检测（HPLC-FLD）进行测定,单糖的分离采用Inertsil ODS-3 C18色谱柱（250 mm×4.6 mm,5μm）,流动相组成为5mmol/L甲酸铵（含0.3%甲酸和20 mmol/L四丁基硫酸氢铵）:乙腈=97:3;激发波长（Ex）为313 nm,发射波长（Em）为358 nm。黄精中黄酮的测定采用高效液相色谱法（HPLC）进行测定,流动相组成为0.02%磷酸水溶液（A）-乙腈（B）,梯度洗脱,柱温43℃,流速1.2 m L/min,检测波长270 nm。大鼠血浆中黄酮类化合物的测定采用高效液相色谱串联质谱法（HPLC-MS/MS）进行测定,流动相组成为0.1%甲酸水（A）-乙腈（B）,73%B等度洗脱,流速0.4 m L/min,柱温35℃。质谱检测模式为负离子模式,多反应监测（multiple reaction monition,MRM）定量分析。正交实验优化结果显示,在衍生时间为40 min,衍生温度为70℃,衍生剂用量为200μL时PABA衍生单糖的衍生效果好,乙酸乙酯萃取减少了色谱图的杂峰,提高了检测灵敏度。在该方法的测定条件下,果糖、鼠李糖、半乳糖、葡萄糖、甘露糖、木糖和半乳糖醛酸在各自的线性范围内均具有良好的线性关系,R~2＞0.997,建立的方法灵敏度高,专属性强,加样回收率在97.63%-102.52%之间,测定结果准确。黄精与玉竹的主根及须根中均含有这7种单糖,含量较高的单糖均为甘露糖,黄精中单糖含量较玉竹高,主根中单糖含量较须根中单糖含量高,使用PLS-DA分析能将黄精、玉竹及对应的须根样品区分开。在黄精黄酮的测定条件下,黄精中芦丁、杨梅素、芹菜素、槲皮素、甘草素、山奈酚和异鼠李素在设定的浓度范围内都有良好的线性关系（R~2＞0.999）,测定结果准确,加样回收率在97.95%-103.71%。鸡头黄精中含有所测定的7种黄酮,且黄精中黄酮含量随着辐照剂量的增大而减小。高效液相色谱法测定黄精中7种黄酮类化合物具有灵敏度高,专属性强的特点,可用于黄精中黄酮含量的测定。黄精黄酮在大鼠体内的药代动力学研究结果显示,黄精黄酮在大鼠体内的药代动力学经拟合为二室模型,表现为快吸收和慢消除。随着给药剂量的增加,黄酮类化合物在大鼠体内的生物利用度逐渐降低。7种黄酮类成分可以在7 min内完成分析,最低定量限为2 ng/m L。使用高效液相色谱串联质谱法测定大鼠血浆中黄酮类化合物分析速度快、灵敏度高,测定结果准确,适用于大鼠体内的黄酮类化合物的含量测定。本研究采用创新性的分析方法对黄精中多糖及黄酮类成分进行了测定,并将黄酮类化合物的血浆药物浓度测定方法应用于大鼠体内药代动力学研究。研究结果可为完善黄精药材的质量标准提供可行性的依据,为黄精药材的临床使用提供可参考的依据。
- 作者：
- 徐胜
- 学位授予单位：
- 湖北科技学院
- 授予学位：
- 硕士
- 学位年度：
- 2021年
- 导师姓名：
- 范宝磊；刘涛
- 中图分类号：
- R284；R285
- 关键词：
- 黄精；多糖；黄酮；质量评价；药代动力学
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