红枣γ-氨基丁酸测定方法的优化及应用研究
高效液相色谱法(HPLC)是目前测定γ-氨基丁酸(GABA)含量最为常用的方法,但是,现有HPLC法存在流动相配比过于繁杂、流速较高、系统压力较大、分析所需周期时间久等缺点,因此,本研究以红枣为研究对象,首先,对丹酰氯(Dansyl-CI)柱前衍生HPLC法、2,4-二硝基氯苯(FDCB)柱前衍生HPLC法、2,4-二硝基氟苯(FDNB)柱前衍生HPLC法和异硫氰酸苯酯(PITC)柱前衍生HPLC法4种方法进行优化和建立;然后,分别对10类不同品种的鲜枣和4种红枣产品进行GABA含量测定;最后,对四种优化后的GABA含量测定方法进行对比分析。获得如下结论:1、丹酰氯法测定红枣GABA的方法优化及建立通过研究得出:甲醇(A)和0.5%甲酸(B)为流动相,洗脱梯度:0-15min,60%-80%(A);15-16min,80-100%(A);16-20min,100%(A);20-21min,100-60%(A);21-25min,60%(A);流速0.7m L/min。优化后的色谱条件具有基线平稳、分离度高、系统压力小且分析周期短等优点。在该分析条件下,方法具有线性好、检出限和定量限低、精密性和回收率高等特点。2、2,4-二硝基氯苯法测定红枣GABA的方法优化及建立采用与丹酰氯柱前衍生法相同的HPLC条件,对衍生条件进行优化,研究得出:衍生温度90℃;衍生时间1h;硼酸钠浓度0.01mol/L;衍生剂添加量取3m L。该方法具有线性好、检出限和定量限低、精密性和回收率高的特点。3、2,4-二硝基氟苯法测定红枣GABA的方法优化及建立采用与丹酰氯柱前衍生法相同的HPLC条件,对衍生条件进行优化,研究得出:衍生温度60℃;衍生时间45min;衍生剂添加量取1m L。该方法具有线性好、检出限和定量限低、重现性和回收率高的特点。试用于大批量红枣样品中GABA的定量分析。4、异硫氰酸苯酯法测定红枣GABA的方法优化及建立通过研究得出:流速0.7m L/min;柱温30℃;进样体积10μL;甲醇(A)和0.1 mol/L乙酸钠水溶液(p H=6.5,含0.5%三乙胺)(B)为流动相;洗脱梯度:0-15min,40%-60%(A);15-16min,60-100%(A);16-20min,100%(A);20-21min,100-40%(A);21-30min,40%(A);检测波长252nm。该方法具有线性好、检出限和定量限低、重现性和回收率高的特点。5、红枣样品中GABA的测定分析了10个鲜枣样品及4个红枣产品中的GABA含量,10个鲜枣样品的GABA含量在127.44-327.37μg/g DW范围内,其中鲜骏枣的GABA含量最高,而鲜酸枣的GABA含量最低。通过对4个红枣产品中GABA进行测定,干制骏枣GABA含量最高,超过500μg/g DW,但是枣汁、枣酱和枣泥等产品GABA含量比干制骏枣低得多。通过对Dansyl-Cl、FDCB、FDNB和PITC法的比较,发现四种方法测定的结果间无统计学显著差异(p>0.05),说明均能用于批量红枣样品的GABA含量测定。但从衍生温度、衍生步骤、试剂价格等因素考虑,Dansyl-Cl和FDNB两种方法是较为理想的批量红枣样品中GABA的测定方法。
- 作者:
- 王能凤
- 学位授予单位:
- 塔里木大学
- 授予学位:
- 硕士
- 学位年度:
- 2022年
- 导师姓名:
- 侯旭杰;蒲云峰
- 中图分类号:
- TS255.7
- 关键词:
- 红枣;γ-氨基丁酸;柱前衍生高效液相色谱法;含量测定
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- 基金项目:
- 兵团财政科技计划资助项目“南疆红枣全价利用加工关键技术研究”的部分研究成果,(项目编号:2021BB013),课题主持人: 蒲云峰 教授(塔里木大学)