新疆南疆地区牛支原体的分离鉴定及致病性研究
牛支原体可以引起肺炎、乳腺炎、关节炎、中耳炎、角膜结膜炎、脑膜炎、心内膜炎等各种疾病,在世界范围内广泛传播并造成了巨大的损失。在我国大多数省份均有牛支原体感染的相关报道,新疆南疆地区牛支原体感染情况较为严重。本研究在目前没有普遍有效的牛支原体疫苗及牛支原体耐药性逐步升高的情况下,采集新疆南疆地区相关样本通过PPLO培养基进行分离纯化、PCR检测、测序分析、染色镜检、生长特性检测、药敏实验、感染试验等方法获取实验相关数据,为后续牛支原体疫苗的研发及相关研究筛选牛支原体田间株并为临床诊断治疗提供一定的参考。分离鉴定结果表明,成功分离到22株牛支原体,在MTB液体培养基中表现出黄色、清澈、透明的特点,在MTA固体培养基中观察到了明显的“煎蛋样”菌落且边缘整齐、有中心脐;后经测序结果选取3株同源性较低,亲缘关系较远的分离株进行后续试验;3株牛支原体之间同源性为98.2%-98.5%,与牛支原体标准株PG45的同源性为98.6%-99.0%;在进化树上本实验分离株与其它牛支原体分离株处于同一分支,其中分离株1与KG4397同源性最近;分离株2与CQ-W70,KG4397同源性最近;分离株3与NM2012等同源性最近。通过革兰染色及吉姆萨染色对牛支原体菌落及菌体进行染色,经革兰氏染色后牛支原体菌落及菌体呈现黄色,但在1000X镜下难以发现菌体,染色效果较差;而吉姆萨染色在1000X镜下呈现蓝色,染色效果良好。通过CCU检测生长曲线后,三株牛支原体生长速度略有差异,均可以到达10~9CCU/m L。在药敏实验上,三个分离株对红霉素、阿奇霉素、四环素、多粘菌素B和复方新诺明均不敏感;对阿米卡星、米诺环素、强力霉素、氟苯尼考、克林霉素、左旋氧氟沙星、环丙沙星较为敏感;其中1号分离株对喹诺酮类药物耐药。感染试验结果表明,牛支原体对鸡胚具有致病性,可以影响鸡胚的生长发育并造成鸡胚的死亡,并在鸡胚尿囊腔中通过PCR检测及分离鉴定检测到了牛支原体的存在。在致病性上1号分离株在致死率（20%）、尿酸盐沉积率（30%）、平均体重（9.50g）方面表现出的毒力均强于2、3号分离株,但均为弱毒株。在小鼠致病性中,攻毒后小鼠体重、体温、肺部均与对照组一致,通过PCR检测及病原分离也没有发现牛支原体的存在。仅有脾脏出现了淋巴细胞增多的现象,从目前来看小鼠并不适合作为牛支原体感染模型。
- 作者：
- 刘庆国
- 学位授予单位：
- 塔里木大学
- 授予学位：
- 硕士
- 学位年度：
- 2022年
- 导师姓名：
- 武军元
- 中图分类号：
- S852.62
- 关键词：
- 新疆南疆；牛支原体；生长特性；致病性
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- 基金项目：
- 塔里木畜牧科技兵团重点实验室开放课题“新疆南疆规模化场牛支原体感染情况调查及灭活疫苗田间试验”的部分研究成果（项目编号:HS201802）,课题主持人:武军元副教授（塔里木大学）