复方中草药制剂对IBDV引起青脚麻鸡免疫抑制的抵抗作用及机制研究

为研究两种组方不同浓度的复方中草药制剂对IBDV引起青脚麻鸡免疫抑制的抵抗作用及作用机制。选用28日龄未接种法氏囊疫苗的青脚麻鸡300只,适应性饲养一周后,通过滴鼻和点眼感染IBDV毒株,随机分为8组,对照组和攻毒组分别饲喂基础日粮,试验A-1、A-2和A-3组分别在攻毒后的基础日粮中添加0.5%、1.0%和1.5%的A组方中草药制剂,试验B-1、B-2和B-3组分别在攻毒后的基础日粮中添加0.5%、1.0%和1.5%的B组方中草药制剂。试验期7天。分别在感染后第3d和7d,每组随机选取6只动物进行采血取材。运用组织学、免疫组织化学、实时荧光定量PCR、Western-blot和ELISA等技术检测青脚麻鸡免疫器官的各项指标。试验结果如下:1、复方中草药制剂对感染IBDV青脚麻鸡血清免疫球蛋白和IBDV抗体以及免疫器官细胞因子的影响复方中草药制剂能明显改善IBDV对青脚麻鸡免疫球蛋白和IBDV抗体以及免疫器官细胞因子的影响。IBDV感染后3 d,与对照组相比,攻毒组血清中IgA、IgG和IgM含量显著降低（P<0.05）,血清中IBDV抗体水平显著升高（P<0.05）。与攻毒组相比,血清中IgA和IgG含量显著升高（P<0.05）;B-1组血清中IgG含量显著升高（P<0.05）。IBDV感染后7 d,与对照组相比,攻毒组血清中IgA和IgG含量显著降低（P<0.05）,血清中IBDV抗体水平显著升高（P<0.05）。与攻毒组相比,试验各组血清中IgA、IgG和IgM含量以及IBDV抗体水平与攻毒组相比有所升高,但无明显差异（P>0.05）。IBDV感染后3 d,与对照组相比,攻毒组法氏囊IL-2和INF-γ含量、胸腺INF-γ含量、脾脏IL-4和INF-γ含量都显著降低（P<0.05）。与攻毒组相比,A-1组法氏囊INF-γ含量显著升高（P<0.05）;A-2组法氏囊IL-4含量、胸腺IL-2含量显著升高（P<0.05）;B-1组法氏囊INF-γ含量、胸腺IL-4含量都显著升高（P<0.05）;B-3组法氏囊和胸腺IL-4含量显著升高（P<0.05）。IBDV感染后7d,与对照组相比,攻毒组法氏囊IL-2和INF-γ含量、脾脏IL-2含量都显著降低（P<0.05）。与攻毒组相比,A-2组法氏囊INF-γ含量显著升高（P<0.05）;A-3组法氏囊IL-2含量和脾脏INF-γ含量显著升高（P<0.05）;B-1组法氏囊INF-y含量和胸腺IL-4含量显著升高（P<0.05）;B-2组法氏囊和胸腺IL-2含量显著升高（P<0.05）;B-3组法氏囊IL-2含量显著升高（P<0.05）。2、复方中草药制剂对感染IBDV青脚麻鸡免疫器官发育的影响复方中草药制剂能明显降低IBDV对青脚麻鸡免疫器官的损伤。IBDV感染后3d,与对照组相比,攻毒组法氏囊指数、脾脏指数显著升高（P<0.05）,显微结构观察测量得,攻毒组法氏囊小叶面积、胸腺皮质厚度和脾小结面积明显降低了（P<0.05）。与对照组相比,B-1组法氏囊指数、A-1组脾脏指数、A-2组脾脏指数显著降低了（P<0.05）,A-2和B-1组法氏囊小叶和脾小结面积明显升高（P<0.05）;A-3组胸腺皮质厚度明显升高（P<0.05）。IBDV感染后7d,与对照组相比,攻毒组法氏囊指数显著降低了（P<0.05）,而攻毒组脾脏指数显著升高了（P<0.05）,攻毒组法氏囊小叶面积明显降低（P<0.05）,脾小结面积和脾动脉周围淋巴鞘面积都明显升高（P<0.05）。与攻毒组相比,A-1组脾指数显著降低了（P<0.05）;A-2组法氏囊指数显著升高了（P<0.05）,A-3和B-1组法氏囊指数显著升高了（P<0.05）;A-3、B-1和B-2组脾脏指数显著降低了（P<0.05）;A-2组和B-1组法氏囊小叶面积明显升高了（P<0.05）;B-1组胸腺皮质明显高于攻毒组（P<0.05）。3、复方中草药制剂对感染IBDV青脚麻鸡免疫器官抗氧化功能的影响复方中草药制剂能明显改善IBDV对青脚麻鸡免疫器官抗氧化能力的影响。IBDV感染后3 d,与对照组相比,攻毒组法氏囊T-AOC活性、T-SOD活性和GSH-Px含量、胸腺T-AOC活性和GSH-Px含量都显著降低（P<0.05）,法氏囊、胸腺和脾脏MDA含量都显著升高（P<0.05）;与攻毒组相比,A-1组法氏囊MDA含量显著降低（P<0.05）;A-2组法氏囊和胸腺MDA含量显著降低（P<0.05）,法氏囊T-SOD活性、胸腺GSH-Px含量、脾脏T-SOD活性和GSH-Px含量都显著升高（P<0.05）;A-3组胸腺T-AOC活性显著升高（P<0.05）;B-1组法氏囊、胸腺和脾脏MDA含量显著降低（P<0.05）,法氏囊和胸腺T-AOC活性、脾脏T-SOD活性和GSH-Px含量都显著升高（P<0.05）;B-3组脾脏T-AOC活性显著升高（P<0.05）。攻毒7d后,与对照组相比,攻毒组法氏囊和胸腺MDA含量都显著升高（P<0.05）,攻毒组法氏囊T-AOC活性和GSH-Px含量、胸腺和脾脏GSH-Px含量都显著降低（P<0.05）;与攻毒组相比,A-1组法氏囊GSH-Px含量显著升高（P<0.05）;A-2组法氏囊和胸腺MDA含量都显著降低（P<0.05）,法氏囊T-SOD活性、胸腺GSH-Px含量、脾脏T-SOD活性和GSH-Px含量都显著升高（P<0.05）;A-3组法氏囊MDA含量显著显降低（P<0.05）,胸腺GSH-Px含量显著升高（P<0.05）;B-1组法氏囊和胸腺MDA含量都显著降低（P<0.05）,法氏囊GSH-Px含量和胸腺T-SOD活性都显著升高（P<0.05）;B-2组脾脏GSH-Px含量显著升高（P<0.05）;B-3组脾脏T-SOD活性和GSH-Px含量显著升高（P<0.05）。4、复方中草药制剂对感染IBDV青脚麻鸡免疫器官细胞凋亡的影响复方中草药制剂能促进感染IBDV青脚麻鸡免疫器官细胞的凋亡。IBDV感染后3d,与对照组相比,攻毒组法氏囊和胸腺Caspase-3 mRNA和蛋白表达以及阳性细胞数都显著降低（P<0.05）,攻毒组脾脏Caspase-3阳性细胞数显著降低（P<0.05）。与攻毒组相比,A-1组法氏囊Caspase-3 mRNA表达和胸腺Caspase-3阳性细胞数都显著升高（P<0.05）;A-2组法氏囊Caspase-3 mRNA和蛋白的表达、脾脏Caspase-3 mRNA的表达和阳性细胞数都显著升高（P<0.05）;B-1组法氏囊Caspase-3 mRNA的表达和阳性细胞数、胸腺Caspase-3 mRNA和蛋白的表达以及阳性细胞数都显著升高（P<0.05）;B-3胸腺Caspase-3阳性细胞数显著升高（P<0.05）。IBDV感染后7 d,与对照组相比,攻毒组法氏囊Caspase-3 mRNA和蛋白表达以及阳性细胞数、胸腺Caspase-3阳性细胞数都显著降低（P<0.05）;A-2组法氏囊Caspase-3 mRNA和蛋白表达以及阳性细胞数都显著升高（P<0.05）;B-2组胸腺Caspase-3阳性细胞数显著升高（P<0.05）;B-3组胸腺Caspase-3 mRNA明显降低（P<0.05）。5、复方中草药制剂对感染IBDV青脚麻鸡免疫器官TLR3/NFKB信号通路的影响复方中草药制剂对感染IBDV青脚麻鸡免疫抑制的抵抗作用与TLR3/NFκB信号通路有关。IBDV感染3d后,与对照组相比,攻毒组法氏囊和脾脏TLR3/NFκB mRNA与蛋白表达都显著升高（P<0.05）。与攻毒组相比,A-1组法氏囊中TLR3 mRNA表达显著降低（P<0.05）;A-2组法氏囊TLR3/NFκB mRNA和蛋白表达都显著降低（P<0.05）;B-1组法氏囊中TLR3 mRNA和蛋白表达、脾脏NFκB蛋白表达都显著降低（P<0.05）。IBDV感染7 d后,与对照组相比,攻毒组法氏囊和脾脏TLR3 mRNA与蛋白表达都显著升高（P<0.05）;攻毒组胸腺NFκB蛋白表达明显升高（P<0.05）。与攻毒组相比,A-1组脾脏TLR3蛋白表达显著降低（P<0.05）。上述结果中可得出,IBDV能明显破坏青脚麻鸡血液指标、免疫器官质量和指数、组织结构、抗氧化和免疫功能,导致机体出现免疫抑制。攻毒后在饲料中添加复方中草药制剂能明显改善IBDV对机体的损伤,其中以1.0%浓度的组方A和0.5%浓度的组方B效果最佳。本研究结果还显示了,IBDV感染机体与TLR3/NFκB通路有关,而中草药对IBDV引起青脚麻鸡免疫抑制的抵抗作用也与TLR3/NFκB通路有关。因此,本试验复方中药制剂可作为一种饲料添加剂,为中草药在预防和治疗鸡传染性法氏囊病及其它畜禽相关疫病中的应用提供理论参考。