14种铁线莲属植物DNA条形码分子鉴定及棉团铁线莲指纹图谱研究
目的:建立14种铁线莲属植物DNA条形码分子鉴定方法以及棉团铁线莲HPLC指纹图谱,为该属植物质量标准的研究提供参考依据。方法:采用DNADNA条形码分子鉴定方法对样品进行DNA提取,应用ITS2、PsbA-trnH、matk、rbcL等4个序列进行PCR扩增及测序。使用CodonCode Aligner17.0（CodonCodeCo;USA）拼接软件对原始测序峰图进行校对拼接,切除引物及序列两侧低质量区。利用MEGA7.0软件对所得序列进行综合比对分析,计算种内和种间遗传距离。分析比较不同序列种内种间的变异关系,并用邻接（NJ）法构建系统聚类树,最终从分子水平鉴定14种铁线莲属植物。运用HPLC法对14批不同产地的棉团铁线莲进行HPLC指纹图谱研究,色谱条件:色谱柱Welchrom ColumnC18（4.6mm×300 mm,5μm）;流动相为甲醇:0.2%磷酸水溶液梯度洗脱;流速:1.0ml/min;柱温30℃;检测波长330nm;进样量10μL。结果:DNA提取、PCR扩增和测序结果来看,样品均能成功提取出DNA。ITS2、PsbA-trnH、matk、rbcL等4个序列均能扩增出目的片段且能获得较高质量的测序碱基及峰图。从序列比对、遗传距离考察以及构建系统发育树结果来看,14种铁线莲属植物中ITS2共有248个排列位点,其中变异位点113个;PsbA-trnH序列共有440个排列位点,其中变异位点79个;matK序列共有788个排列位点,其中变异位点767个;rbcL序列共有583个排列位点,其中变异位点408个。ITS2、PsbA-trnH、matk、rbcL序列棉团铁线莲种内遗传距离平均值分别为0.003、0.008、0.000、0.513。14种铁线莲属植物的ITS2、PsbA-trnH、matk、rbc序列种间遗传距离平均值分别为:0.039、0.062、0.099、0.735。PsbA-trnH序列和matk序列的种间距离较小。种间变异明显大于种内变异,表明DNA条形码适用于铁线莲属植物种分子水平上的鉴定。从系统聚类树图中可以看出,ITS2序列具有同源性,而rbcL和PsbA-trnH序列能够鉴别种间物种。分析不同产地棉团铁线莲HPLC谱指纹图谱,以S7为参照峰,采用“中药色谱指纹图谱相似度评价系统（2004A版）”软件进行相似度分析。分析出21个共有峰,同时指认了其中的3个共有峰,分别为绿原酸、咖啡酸、金丝桃苷。14批棉团铁线莲的相似度在0.819-0.990之间。结论:DNA条形码分子鉴定技术可用于蒙药的鉴定。ITS2序列可以鉴别出棉团铁线莲和东北铁线莲之间的亲缘关系较近,聚为一支;牛尾铁线莲和粗齿铁线莲之间的亲缘关系较近,聚为一支;大瓣铁线莲和半钟铁线莲之间的亲缘关系较近,聚为一支;黄花铁线莲和紫萼铁线莲之间的亲缘关系较近,聚为一支;PsbA-trnH序列能鉴别棉团铁线莲、单叶铁线莲、紫萼铁线莲、黄花铁线莲、半钟铁线莲、大瓣铁线莲、芹叶铁线莲、短尾铁线莲。rbcL序列可鉴别棉团铁线莲、芹叶铁线莲、单叶铁线莲、短尾铁线莲、大瓣铁线莲、大叶铁线莲、半钟铁线莲、粗齿铁线莲;matK序列可鉴别棉团铁线莲和短尾铁线莲。因此ITS2、PsbA-trnH、rbcL、matK序列可用于14种铁线莲属植物的种间鉴定。HPLC指纹图谱的精密度、重复性和稳定性;适用于棉团线莲药材的鉴别及质量评价。
- 作者：
- 木其尔
- 学位授予单位：
- 内蒙古民族大学
- 授予学位：
- 硕士
- 学位年度：
- 2020年
- 导师姓名：
- 包桂花
- 中图分类号：
- R282.5
- 关键词：
- 铁线莲属；14种药用植物；DNA条形码；棉团铁线莲；HPLC指纹图谱
-