小单孢菌选择性分离鉴定及其次级代谢产物挖掘
放线菌是抗生素的主要来源,其中又以链霉菌居多。随着耐药菌株的出现,人们对抗生素的需求日益增加,而从链霉菌中挖掘新型抗生素越来越困难,于是人们将目光聚集到稀有放线菌,尤其小单孢菌。本文以新疆塔里木河流域柽柳林淤泥为样本,建立一种向土样添加阿米卡星进行原位培养的预处理方法,同时运用苯酚及干热处理,用P3和HV两种培养基进行小单孢菌选择性分离,纯培养后经16S rRNA基因鉴定,共分离得到59株放线菌,其中42株小单孢菌,占总体71%。对分离得到的小单孢菌采用“菌饼对峙法”进行活性初筛,指示菌株为大肠杆菌（Escherichia coli ATCC 25922）、金黄色葡萄球菌（Staphylocccus aureus ATCC 6538）和白色念珠菌（Candida albicans ATCC 64550）,结果显示共有11株小单孢菌对金黄色葡萄球菌和白色念珠菌有抑菌活性。对11株活性小单孢菌进行发酵,发酵产物采用“滤纸片法”对三种指示菌株进行活性复筛,结果显示11株小单孢菌的发酵产物对金黄色葡萄球菌和白色念珠菌仍有抑菌活性,故挑选此11株活性小单孢菌进行后续研究。对具有活性的11株活性小单孢菌用高氏一号培养基进行发酵,通过培养特性筛选、紫外光谱筛选、HPLC筛选和HSQC-TOCSY谱学筛选相结合的办法,筛选出TRM 66019A菌丝体生长量大、紫外吸收具有共轭系统、代谢产物丰富。菌株TRM 66019A分别利用4种发酵培养基进行发酵,通过对发酵液颜色比较,菌丝体密度观察及TLC,HPLC检测,结果显示菌株TRM 66019A采用2号发酵培养基进行发酵,发酵液颜色深,菌丝体密集均一且代谢产物丰富。用2号发酵培养基对TRM 66019A进行大批量发酵,发酵产物经大孔树脂吸附,硅胶柱层析,凝胶柱层析和高效制备液相等方法分离纯化,经1H NMR,13C NMR,HSQC和HMBC等谱图数据进行结构解析,分离得到4个化合物,分别为大豆素、格尔德霉素、17-O-去甲基格尔德霉素和环（亮氨酸-异亮氨酸）二肽。
- 作者：
- 刘文祥
- 学位授予单位：
- 塔里木大学
- 授予学位：
- 硕士
- 学位年度：
- 2020年
- 导师姓名：
- 万传星
- 中图分类号：
- Q935
- 关键词：
- 小单孢菌；阿米卡星；选择性分离；次级代谢产物分离与鉴定
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- 基金项目：
- 本文是国家自然基金-新疆联合基金重点项目"塔里木盆地放线菌资源代谢潜力的深度挖掘" 的部分研究成果(项目编号:U1703236)课题主持人:张利莉 教授(塔里木大学)%"特殊生境放线菌沉默基因簇的激活" (项目编号:2019CB030)课题主持人:罗晓霞 教授(塔里木大学)%"微生物资源利用兵团重点领域创新团队"项目(项目编号:2017CB014)的部分研究成果课题主持人:万传星 教授(塔里木大学)