二甲双胍对PCL引起血管内膜增生的作用
目的:探讨载脂蛋白E（Apolipoprotein E,ApoE）基因敲除小鼠在内皮损伤情况下,左颈总动脉部分结扎术（Partial carotid ligation,PCL）对小鼠血管内膜增生、脂质数量、血管功能的影响,同时研究二甲双胍对PCL引起的小鼠血管损伤的保护作用。在细胞水平上研究二甲双胍对棕榈酸诱导内皮细胞损伤的作用及前动力蛋白2（Prokineticin 2,PK2）、前动力蛋白受体1（Prokineticin Receptor1,PKR1）、磷酸化内皮型一氧化氮合酶（Phosphate endothelial nitric oxide synthase,p-eNOS）、内皮型一氧化氮合酶（Endothelial nitric oxide synthase,eNOS）蛋白表达水平的变化。方法:将ApoE基因敲除小鼠分为4组,分别是PD（Paigen’s high-fat diet）饮食组（对照组）、PD饮食+左颈总动脉部分结扎手术组（PCL手术组）、PD饮食+二甲双胍+手术组（PCL+二甲双胍组）、PD饮食+二甲双胍组（二甲双胍组）。通过HE染色法观察内膜增生情况;通过观察左颈总动脉血管外观判断左颈总动脉中脂质斑块的数量;通过油红O染色法判断脂质的分布位置以及脂质的数量。通过记录预收缩血管环张力变化,判断二甲双胍对血管舒张功能的影响。通过高脂（棕榈酸）诱导的人脐静脉内皮细胞损伤模型,给予二甲双胍后,用Western blot方法检测PK2、PKR1、p-eNOS、eNOS蛋白表达水平的变化。结果:在动物实验中,1.二甲双胍抑制左颈总动脉内膜的增生面积。相比于对照组,PCL手术组小鼠左颈总动脉中内膜增生面积显著增加。相比于PCL手术组,PCL+二甲双胍组小鼠左颈总动脉内膜增生面积显著减少。相比于对照组,二甲双胍组小鼠左颈总动脉内膜增生面积显著减少。2.二甲双胍减少左颈总动脉中脂质含量。相比于对照组,PCL手术组小鼠左颈总动脉中脂质面积显著增加。相比于PCL手术组,PCL+二甲双胍组小鼠左颈总动脉脂质面积显著减少。相比于对照组,二甲双胍组小鼠左颈总动脉脂质面积显著减少。3.二甲双胍减少左颈总动脉中脂质斑块形成相比于对照组,PCL手术组小鼠左颈总动脉脂质斑块长度与左颈总动脉血管总长度的比值显著升高。相比于PCL手术组,PCL+二甲双胍组小鼠左颈动脉脂质斑块长度与左颈总动脉血管总长度的比值显著降低。相比于对照组,二甲双胍组小鼠左颈动脉脂质斑块长度与左颈总动脉血管总长度的比值显著降低。4.二甲双胍改善胸主动脉血管功能。相比于对照组,PCL手术组小鼠胸主动脉舒张显著降低。相比于PCL手术组,PCL+二甲双胍组小鼠胸主动脉舒张性显著升高。相比于对照组,二甲双胍组小鼠胸主动脉舒张性显著升高。在细胞实验中,1.二甲双胍改善棕榈酸诱导的人脐静脉内皮细胞损伤作用。通过检测细胞的存活率发现,棕榈酸处理组细胞存活率显著降低,在给予二甲双胍治疗后,细胞的存活率显著上升。2.棕榈酸下调其诱导的人脐静脉内皮细胞损伤中PK2、PKR1蛋白的表达水平。棕榈酸诱导人脐静脉内皮细胞发生高脂损伤后,PK2、PKR1蛋白的表达水平显著降低。3.二甲双胍上调棕榈酸诱导人脐静脉内皮细胞损伤中PK2、PKR1蛋白表达水平。在人脐静脉内皮细胞中,棕榈酸下调PK2、PKR1蛋白表达水平,在给予二甲双胍后,PK2、PKR1蛋白表达水平升高。4.二甲双胍上调棕榈酸诱导人脐静脉内皮细胞损伤中p-eNOS蛋白表达水平。在人脐静脉内皮细胞中,棕榈酸下调p-eNOS蛋白的表达水平,在给予二甲双胍后,p-eNOS蛋白表达水平升高。结论:在ApoE基因敲除小鼠中,在颈总动脉进行PCL手术产生内皮损伤后,血管出现明显的内膜增生、脂质数量增多、血管舒张功能下降;在给予二甲双胍后,颈总动脉血管内膜增生受到抑制,同时血管中脂质数量减少、血管舒张功能上升。表明二甲双胍减轻血管内膜增生、减少血管中脂质数量、增加血管功能。在人脐静脉内皮细胞中,棕榈酸减少细胞存活率,降低PK2、PKR1蛋白的表达水平,降低p-eNOS、eNOS蛋白的表达水平;在给予二甲双胍后,细胞存活率显著升高,PK2、PKR1蛋白的表达水平也显著升高。因此,二甲双胍减轻血管内膜增生的作用可能与上调PK2、PKR1的水平有关。
- 作者：
- 姜志龙
- 学位授予单位：
- 湖北科技学院
- 授予学位：
- 硕士
- 学位年度：
- 2020年
- 导师姓名：
- 张又枝；甘方良
- 中图分类号：
- R965
- 关键词：
- 二甲双胍；PCL；PK2；PKR1；内膜增生
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