FUNDC1对高脂诱导的人血管内皮细胞的保护作用研究
目的:本研究使用腺病毒过表达FUNDC1,再用棕榈酸处理EA.hy926人血管内皮细胞,建立高脂损伤内皮细胞模型,探讨FUNDC1对高脂损伤的EA.hy926人血管内皮细胞的作用和其可能机制。方法:（1）建立高脂诱导损伤的EA.hy926人血管内皮细胞模型:选择浓度分别为0.1、0.15、0.2、0.25、0.3、0.5、0.7 mmol/L棕榈酸溶液刺激EA.hy926人血管内皮细胞,刺激的时间为24 h。（2）FUNDC1对高脂损伤EA.hy926人血管内皮细胞的保护作用研究:体外培养EA.hy926人血管内皮细胞长至70%80%,将细胞分为4组:对照组、高脂组（0.2 mmol/L棕榈酸）、高脂+空载组（转染空载腺病毒预处理24 h+0.2 mmol/L棕榈酸）、高脂+FUNDC1组（转染FUNDC1腺病毒预处理24 h+0.2 mmol/L棕榈酸）进行CCK8实验检测各组细胞增殖活性;DCFH-DA活性氧检测试剂盒检测各组细胞活性氧含量变化情况;JC-1法测定各组细胞线粒体膜电位变化情况;ATP含量检测试剂盒检测各组细胞ATP的含量;蛋白印迹法检测各组细胞自噬（P62、LC3）和凋亡（Bcl-2、Bax）相关蛋白的表达情况。结果:（1）与对照组相比,浓度为0.2 mmol/L的棕榈酸溶液刺激细胞,时间为24 h,细胞活力显著下降（P<0.01）。（2）与对照组相比较,高脂组细胞活力显著降低（P<0.01）;高脂+FUNDC1组存活率相比高脂组显著上升（P<0.01）,且高脂组和高脂+空载组两组无显著性差异（P>0.05）。（3）与对照组相比,高脂组活性氧含量明显上升（P<0.01）;高脂+FUNDC1组活性氧含量相比高脂组显著下降（P<0.01）,且高脂组和高脂+空载组两组无显著性差异（P>0.05）。（4）与对照组相比,高脂组线粒体膜电位去极化比例明显升高（P<0.01）;高脂+FUNDC1组线粒体膜电位去极化比例相比高脂组显著下降（P<0.01）,且高脂组和高脂+空载组之间无显著差异（P>0.05）。（5）与对照组相比,高脂组ATP含量明显下降（P<0.01）;高脂+FUNDC1组ATP含量相比高脂组显著上升（P<0.05）,且高脂组和高脂+空载组两组无显著性差异（P>0.05）。（6）与对照组相比较,高脂组LC3、P62、Bax量显著上升（P<0.05）,Bcl-2量明显降低（P<0.05）;高脂+FUNDC1组LC3、P62、Bax量相比高脂组显著下降（P<0.05）,Bcl-2量明显升高（P<0.05）,且高脂组和高脂+空载组两组无显著性差异（P>0.05）。结论:（1）在高脂条件下,EA.hy926血管内皮细胞存活率下降、ROS含量升高、线粒体膜电位降低、ATP含量降低,过表达FUNDC1能够改善高脂对EA.hy926血管内皮细胞的损伤情况。（2）过表达FUNDC1可促进EA.hy926血管内皮细胞发生自噬,减少凋亡蛋白表达。
- 作者：
- 张鹏
- 学位授予单位：
- 湖北科技学院
- 授予学位：
- 硕士
- 学位年度：
- 2020年
- 导师姓名：
- 余开湖；甘方良
- 中图分类号：
- R96
- 关键词：
- FUNDC1；棕榈酸；内皮细胞；高脂损伤；自噬
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