丁酸梭菌的筛选及其在生长猪上的应用研究
Screening of Clostridium Butyricum and Its Application in Growing Pigs

本实验采用微生物厌氧培养的方式,从猪粪中分离、筛选出一株丁酸梭菌(Clostridium butyricum);通过菌落形态特征和革兰染色显微观察对菌株进行初步鉴定;并进一步实验,包括糖发酵实验、明胶液化、淀粉水解和石蕊牛乳等生理生化实验及16SrDNA基因序列分析鉴定;然后对其生长特性和体外抑菌性能进行研究分析.以生长猪为试验对象,研究在生长猪的基础日粮中添加丁酸梭菌菌粉及丁酸梭菌、酵母菌、芽孢杆菌和粪肠球菌复合菌发酵生物饲料对其生长性能、腹泻率、血清生化指标、免疫性能和抗氧化性能的影响,并测定各组生长猪粪便中微生物大肠杆菌、乳酸菌和沙门氏菌的数量.丁酸梭菌的筛选、鉴定:从猪粪中筛选出一株丁酸梭菌,并称其为C butyricum C3.丁酸梭菌生长特性:丁酸梭菌C3最适生长温度为34℃,最适初始pH为7.0;其菌悬液在90℃水浴1 min有31.7%的存活率.丁酸梭菌C3在梭菌增殖培养液(RCM)中培养4h开始迅速繁殖生长,在8h达到顶点;RCM液体培养基的pH值随培养时间逐渐下降,12 h后pH逐渐稳定在4.6左右.丁酸梭菌C3对丁胺卡那和庆大霉素具有耐药性,对青霉素、环丙沙星、诺氟沙星和复方新诺明敏感性较低.体外抑菌性能:丁酸梭菌C3发酵上清液对金黄葡萄球菌、白葡萄球菌、仔猪沙门氏菌和仔猪大肠杆菌均有抑制效果;对大鼠肠球菌和假单胞菌抑制效果不明显.丁酸梭菌C3的粗提细菌素抑菌效果优于上清液的抑菌效果.丁酸梭菌在生长猪上的应用研究:试验选用44±2.4kg健康的杜*长*大三元杂生长猪共160头,采用单因子随机试验设计,分为对照组C、试验TPF、试验FPF和试验CB 4个组,每组2个重复,每重复20头猪;对照组C饲喂生长育肥猪配合饲料,试验TPF、试验FPF和试验CB在饲喂生长育肥猪配合饲料的基础上分别添加生物饲料A、生物饲料B和丁酸梭菌菌粉;其中生物饲料A的pH值为4.2,含水量为44%,酵母菌、芽孢杆菌和粪肠球菌含量分别为16*108 cfu/g、13*108 cfu/g和32*108cfu/g;生物饲料B的pH值为4.3,含水量为42%,酵母菌、芽孢杆菌、粪肠球菌和丁酸梭菌含量分别为2*108 cfu/g、10*108 cfu/g、33*108 cfu/g和20*104 cfu/g.结果表明:生长性能:在试验1-34天日增重、采食量和料重比均无显著差异(P>0.05);试验17-34天,平均日增重和平均日采食量均有提高趋势(P>0.05).粪便中微生物区系:与对照组C相比,试验TPF、试验FPF和试验CB粪便中大肠杆菌的数量分别降低6.5%(P>0.05)、21.8%(P<0.05)和17.0%(P<0.05);乳酸菌的数量分别提高13.2%、10.7%和13.0%,差异均显著(P<0.05).与试验TFP相比,试验FPF的大肠杆菌数量显著降低16.4%(P<0.05);血清酶:与对照组C相比,试验TPF、试验FPF和试验CB血清中谷丙转氨酶分别降低 4.7%(P>0.05)、16.3%(P<0.05)和 25.0%(P<0.05);与试验 TPF相比,试验FPF和试验CB血清中谷丙转氨酶分别降低12.2%(P<0.05)和21.3%(P<0.05).免疫性能:与对照组C相比,试验TPF、试验FPF和试验CB免疫球蛋白A(IgA)分别提高29.6%、35.2%和16.9%,差异均不显著(P>0.05).免疫球蛋白G(IgG)分别提高 0.32%(P>0.05)、9.6%(P>0.05)和 20.4%(P<0.05).抗氧化性能:与对照组C相比,试验TPF、试验FPF和试验CB谷胱甘肽过氧化物酶 GSH-PX 分别提高 2.4%(P>0.05)、3.4%(P<0.05)和 9.5%(P<0.05);总超氧化歧化酶T-SOD分别提高0.3%、8.2%和9.2%,差异均显著(P<0.05);与试验TPF相比,试验FPF和试验CB血清中GSH-PX分别提高2.5%(P>0.05)和8.5%(P<0.05);血清中T-SOD分别提高7.9%和8.9%,差异均显著(P<0.05).综上所述,本实验从猪粪中筛选出一株丁酸梭菌,并测定其最适温度、最适初始pH值以及对抗生素的敏感性;同时,其上清液对金黄葡萄球菌、白葡萄球菌、仔猪沙门氏菌和仔猪大肠杆菌均有抑制效果.在生长猪的基础日粮中添加丁酸梭菌菌粉及含丁酸梭菌复合菌发酵生物饲料,能显著降低粪便中大肠杆菌数量,增加粪便中乳酸菌数量;同时能显著提高血清中IgG的含量,提高GSH-PX和T-SOD的含量.