青藤碱对紫杉醇致痛作用和抗肿瘤效应的影响

目的:探讨青藤碱(SIN)对紫杉醇(PT)所致的病理性疼痛及其抗肿瘤效应的影响,为SIN的开发利用和PT的临床合理使用提供提供实验依据.方法:1.为考察SIN单次给药对PT引起的神经病理性疼痛的影响,将45只SD大鼠(200±20 g)随机分为5组(每组9只):对照组(A组),PT组(B组),PT+SIN 10 mg/kg组(C组),PT+SIN 20 mg/kg组(D组),PT+SIN 40 mg/kg组(E组).B、C、D、E组大鼠在第1、3、5和7 d分别腹腔注射PT(2 mg/kg,每天1次)制备神经病理性疼痛模型,A组大鼠注射等体积溶媒.第9 d,C、D、E组大鼠分别腹腔注射SIN 10、20和40 mg/kg(每天1次),A、B组大鼠分别腹腔注射等体积生理盐水.采用机械刺激法和热刺激法分别在第-1 d、8 d和第9 d注射SIN后的0、60、180、240 min测定大鼠机械刺激缩足阈值(MWT)和热刺激缩足潜伏期(TWL).2.为考察SIN多次给药对PT引起的神经病理性疼痛的影响,将40只小鼠(20±2 g)随机分为4组(每组10只):对照组(A组),PT组(B组),PT+SIN 40 mg/kg组(C组),PT+SIN 80 mg/kg组(D组).B、C、D组小鼠在第1、3、5和7 d分别腹腔注射PT(4 mg/kg,每天1次),A组小鼠注射等体积溶媒.另外,在第1至15 d,C、D组小鼠分别腹腔注射SIN 40和80 mg/kg(每天1次),A、B组小鼠分别腹腔注射等体积生理盐水.采用机械刺激法和热刺激法分别分别从-1 d开始直至第16 d每两天测定一次小鼠MWT和TWL.3.为考察SIN对PT抗肿瘤效应的影响及其机制,首先采用MTT法检测不同浓度的SIN和PT分别单独作用24、48和72 h后对胰腺癌BXPC3细胞活力的影响;然后将SIN和PT按一定比例联合作用于胰腺癌BXPC3细胞48h,测定其抑制率和联合指数(Combined Index,CI);最后采用蛋白免疫印迹法测定SIN和PT分别单独和联合作用于胰腺癌BXPC3细胞后AKT和mTOR表达及其磷酸化水平的变化.结果:1.SIN单次给药对PT引起的大鼠神经病理性疼痛的影响的实验结果显示:与对照组比较,PT组的MWT和TWL在注射PT后明显降低,具有显著性差异(p<0.01);与PT组比较,PT+SIN 10 mg/kg组各时间点的MWT和TWL均没有明显差别,而PT+SIN 20 mg/kg组和PT+SIN 40 mg/kg组的MWT和TWL在注射SIN后均明显增加(p<0.05或p<0.01),且PT+SIN 40 mg/kg组的MWT增加的幅度和持续的时间均明显高于PT+SIN 20 mg/kg组.2.SIN多次给药对PT引起的小鼠神经病理性疼痛的影响的实验结果显示:与对照组比较,PT组的MWT和TWL分别从第4d和第8 d开始降低,第10 d至16 d均具有显著性差异(p<0.01或p<0.05).与PT组比较,PT+SIN 40 mg/kg和PT+SIN 80 mg/kg组的MWT分别从第4d开始增加,第4 d至16 d均具有显著性差异(p<0.01),而TWL分别从第8 d开始增加,第10 d至16 d均具有显著性差异(p<0.01);PT+SIN 40 mg/kg组和PT+SIN 80 mg/kg组的MWT和TWL均没有随着时间的延长而降低.3.SIN对PT抗肿瘤效应的影响的实验结果显示:不同浓度的SIN(0.125、0.25、0.5、1.0、2.0 mmol/L)和不同浓度的PT(10、20、40、80、160 nmol/L)分别作用24、48及72 h后对胰腺癌BXPC3细胞增殖均出现抑制作用;SIN和PT按一定浓度比例(25000∶1)联用对胰腺癌BXPC3细胞增殖的抑制作用明显高于单用SIN或PT.不同浓度的PT(10、20、40、80、160 nmol/L)联用SIN(1.5 mmol/L)的抑制率明显高于单用PT,产生相同抑制率时联用SIN所需的PT浓度明显低于单用PT.无论SIN和PT单用还是联用,p-AKT和p-mTOR的表达水平均显著性降低(p<0.05 vs control);PT与SIN联用后p-AKT和p-mTOR表达水平均明显低于单用PT(p<0.05 vs PT).结论:1.SIN单次给药可缓解PT诱导的神经病理性疼痛,其镇痛效应和持续时间呈现剂量依赖性,但镇痛作用持续时间不长.2.SIN多次给药能产生持续平稳地镇痛作用,有效缓解紫杉醇引起的病理性疼痛而不产生耐受性.3.PT与SIN联用产生协同抗肿瘤效应,联用SIN可减少PT的用量而不改变其抗肿瘤效应,其机制可能与其抑制AKT/mTOR信号通路有关.