小鼠触须毛囊外根鞘体外再生模型的建立及干细胞迁移特征分析
A Mouse Model for Analyzing Stem Cell Migration Characteristics on Regeneration of Hair Follicle Outer Root Sheaths
目的观察小鼠触须毛囊外根鞘体外再生过程中形态变化,探究小鼠触须毛囊外根鞘体外再生过程中干细胞动态分布、增殖分化以及迁移特征,初步探讨这些特征与小鼠触须毛囊外根鞘体外再生的关系.方法体外无菌条件下,使用解剖显微外科剪对3 d龄昆明乳鼠触须解剖并分离出毛囊外根鞘,进行体外毛囊外根鞘气液界面三维培养,OCT包埋,HE染色观察毛囊外根鞘再生形态;免疫荧光染色法观察干细胞及中性粒细胞在毛囊外根鞘体外再生过程中的动态变化.结果1、通过HE染色观察体外培养不同时期的小鼠触须毛囊外根鞘组织结构,创伤第5 d毛囊外根鞘再生趋于完整.2、细胞增殖EdU染色发现,细胞增殖由玻璃膜外围启动,并逐渐向玻璃膜内部表达,最终形成毛囊样结构.3、细胞凋亡TUNLE染色发现,小鼠触须毛囊外根鞘培养1 d时,玻璃膜处细胞凋亡增多;在培养至5 d时,随着玻璃膜内部细胞增殖逐渐增加,凋亡细胞散落分布于玻璃膜内部.4、α-SMA染色结果发现,小鼠触须毛囊外根鞘再生后新生细胞由骨架蛋白相连,再生结构趋于完整.5、干细胞标记物CD34、CD200免疫荧光显示,外根鞘再生过程中CD34、CD200阳性细胞向再生部位迁移.6、巨噬细胞F4/80及中性粒细胞LY6G免疫荧光结果发现:创伤后发生炎症反应,巨噬细胞受到创伤刺激后向炎症部位迁移,并在外根鞘玻璃膜外围形成一层细胞层.结论分离的小鼠触须毛囊外根鞘在培养第5d时初步重塑毛囊基本形态,毛囊干细胞由隆突部开始表达并参与母体外根鞘形态重塑,中性粒细胞和巨噬细胞在再生过程中发挥着重要作用.
- 作者：
- 郭景旭
- 学位授予单位：
- 塔里木大学
- 专业名称：
- 生物化学与分子生物学
- 授予学位：
- 硕士
- 学位年度：
- 2019年
- 导师姓名：
- 李树伟
- 中图分类号：
- R-332
- 关键词：
- 毛囊外根鞘；EdU；TUNEL；a-SMA；CD200；CD34；LY6G；F4/80
- ORS; EdU; TUNEL; α-SMA; CD200; CD34; LY6G; F4/80;