急性心肌梗死患者血浆外泌体miRNA微阵列表达谱研究
Microarray Expression Profile of Exosomal miRNA in Plasma of Patientes with Acute Myocardial Infarction
背景与目的:稳定性冠心病(Stable Coronary Artery Disease,SCAD)是冠心病(Coronary Heart Disease,CHD)中最常见的类型,而SCAD稳定斑块的失稳定极易导致急性心肌梗死(Acute Myocardial Infarction,AMI)的发生,且预后较差.外泌体(Exosome)是由多种活细胞分泌的纳米级囊泡,并且通过转移微小RNA(miRNA)等生物分子介导着细胞间的信号交流.由于外泌体具有脂质双层结构,使得miRNA等分子能够稳定存在于人体内绝大部分的体液中.本研究初步探讨血浆外泌体miRNA对SCAD进展为AMI早期预测的价值.材料方法:(1)选择6例(3男3女)AMI患者及6例(3男3女)SCAD患者进行血浆外泌体miRNA提取,并对所有超速离心提取的外泌体进行透射电镜观察、蛋白质印迹和nanosight来明确外泌体的纯化效果.(2)对所选样本进行miRNA微阵列分析,并且进一步采用GeneOntology(GO)及一些经典通路对具有显著表达差异(p<0.05)外泌体miRNA的靶基因功能进行预测.(3)我们根据芯片分析结果,挑选出靶基因功能与AMI病理机制相关信号通路的3个miRNA(miRNA-1915-3p、miRNA-4507和miRNA-3656),并在30例AMI患者及30例SCAD患者之间进行荧光定量PCR(qPCR)验证芯片结果.(4)临床资料(包括性别、年龄、白细胞数、血小板数、红细胞压积、谷丙转氨酶、谷草转氨酶、肌酐、空腹血糖、甘油三酯、总胆固醇、低密度脂蛋白胆固醇、肌钙蛋白、B型钠尿肽前体、射血分数、左室舒张末径、收缩活动障碍等)从病人的住院记录中获取,将AMI患者血浆外泌体miRNA与临床特征进行相关性分析.结果:(1)通过电镜透射、蛋白质印迹以及粒径测量分析,纯化所得到的细胞外囊泡为外泌体.(2)外泌体miRNA微阵列分析显示13个miRNA在AMI患者血浆外泌体内表达水平显著下调,靶基因功能富集结果显示部分miRNA与AMI病理机制相关.(3)在30例AMI与30例SCAD患者中行qPCR实验验证目的miRNA的芯片分析结果,结果显示AMI患者血浆外泌体中miRNA-1915-3p、miRNA-4507和miRNA-3656的表达水平低于对照组(p<0.05).ROC曲线分析结果显示miRNA-1915-3p(AUC=0.772,敏感性为90%,特异性为56.7%),miRNA-4507(AUC=0.684,敏感性为90%,特异性为56.7%),miRNA-3656(AUC=0.771,敏感性为83.3%,特异性为60%)的相对表达量可能是早期预测AMI的潜在生物标记物.(4)统计分析结果显示,miRNA-1915-3p的相对表达量与血小板数呈负相关;miRNA-4507的相对表达量与低密度脂蛋白呈负相关;miRNA-3656的相对表达量与射血分数呈正相关.结论:AMI患者血浆外泌体中miRNA-1915-3p、miRNA-4507和miRNA-3656的表达水平可能是早期诊断AMI的新指标.
- 作者:
- 励佶佚
- 学位授予单位:
- 宁波大学
- 专业名称:
- 临床医学(专业学位)
- 授予学位:
- 硕士
- 学位年度:
- 2018年
- 导师姓名:
- 陈晓敏;季林丹;徐进
- 中图分类号:
- R542.22
- 关键词:
- 急性心肌梗死;外泌体;微小RNA;微阵列分析;实时定量聚合酶链反应
- acute myocardial infarction; exosome; miRNA; microarray analysis; real-time quantitative polymerase chain reaction;