新型微萃取方法及荧光生物传感技术在生物样品分析中的应用
生物样品成分复杂、珍贵、稀缺、易失活,给生物样品分析带来了极大挑战.因而生物分析对分析方法的灵敏度和选择性都提出了更高的要求,即分析方法要具备简便、高效、样品用量少、受基质干扰程度小等特点.固相微萃取(SPME)具有样品用量少、萃取效率高、选择性高等特点,与高效液相色谱(HPLC)技术联用适用于多种复杂生物体系分析.生物传感技术具有不需样品分离、高灵敏、分析快速等特点,适用于特征生物分子的分析.针对血药定量分析及肿瘤生物标志物分析两大基本生物分析问题,本论文分别建立了新型固相微萃取-高效液相色谱联用方法和荧光生物传感器.主要研究内容如下:1.通过原位聚合法,以微量吸头为载体制备聚(甲基丙烯酸-乙二醇二甲基丙烯酸酯)(MAA-co-EGDMA)整体小柱用于水样及血浆中育亨宾微萃取.在聚合物的制备过程中,对制备条件进行了系统优化.甲基丙烯酸(MAA)和乙二醇二甲基丙烯酸酯(EGDMA)分别作为功能单体和交联剂,二者摩尔比为1:6;甲醇-二甲基亚砜(7:3)作为混合致孔剂.同时,对聚合物的萃取条件包括洗涤溶剂、上样速率、上样体积和样品溶液pH分别进行了优化,以期获得对育亨宾良好的萃取效果;最后与HPLC联用,用于血浆中育亨宾定量分析.结果表明,建立的方法灵敏度好,检测限低至0.5 ng·mL-1;在1.02000 ng·mL-1范围内线性关系良好(r2=0.998),方法重复性良好(RSD%为2.5%).用于血浆中育亨宾定量分析,回收率良好(97.9103.8%).2.上皮细胞粘附分子(EpCAM)在肿瘤的发生发展中扮演着重要作用,被认为是肿瘤诊断、预后和治疗的一种肿瘤信号分子之一.基于适配体与目标分子的特异性识别结合能力以及toehold辅助的DNA循环扩增原理,我们建立了一种用于EpCAM灵敏检测的无酶荧光生物传感器.当目标分子EpCAM存在时,由于其与适配体的特异性结合,探针a从适配体/探针a复合物释放,引发toehold介导的链置换反应.通过探针a的循环利用,实现了荧光信号扩增.本方法用于EpCAM检测获得了良好的选择性和较高的灵敏度,检测限低至0.1 ng·mL-1.同时,该方法成功用于加标人血清中EpCAM的检测,回收率在97.9-103.8%之间.此外,通过选择相应的适配体,该方法还可拓展应用于其他目标物的灵敏检测.
- 作者：
- 尚兵
- 学位授予单位：
- 湖北科技学院
- 专业名称：
- 药学
- 授予学位：
- 硕士
- 学位年度：
- 2018年
- 导师姓名：
- 陈琴华
- 中图分类号：
- R346
- 关键词：
- 固相微萃取；高效液相色谱；上皮细胞粘附分子；荧光生物传感器
- solid phase micro-extraction； HPLC； epithelial cell adhesion molecule； fluorescent biosensor