副结核分枝杆菌分离及小鼠感染模型的建立
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副结核病(Paratuberculosis)是由副结核分枝杆菌(Mycobacterium avium subspecies paratuberculosis MAP)引起的慢性肠道炎症,主要感染反刍动物,在世界范围内均有广泛流行,目前尚未有国家宣布消灭副结核病.副结核病病程长,一般分为亚临床期和临床期,前者以细胞免疫为主,后者以体液免疫为主要方式.亚临床期持续时间较长,感染动物带菌但不排菌,且不表现出明显的腹泻等临床症状.当前,有关我国牛副结核病的流行情况报道较少.为了解牛副结核病在给我国局部地区的流行状况,本研究采用皮肤迟发性过敏反应(SDTH)、酶联免疫吸附试验(ELISA)和PCR的方法,随机抽取山东地区3个奶牛场共1023头牛进行了检测.SDTH检测到的阳性牛为113头,可疑17头,群体阳性率为11.05%.不同牧场间阳性率水平差别较大,最高为20.16%,最低为6.45%.ELISA检测到的阳性牛为75头,群体阳性率为7.33%.抗体阳性率最高的牧场为16.05%,最低的为3.75%.对ELISA结果阳性牛进行粪便采集,提取粪便基因组进行IS900特异性片段PCR检测,共检测样本74份,阳性3份,阳性率为4.05%.流行病学调查结果显示,副结核病在山东地区牛场中普遍存在,部分牛场阳性率较高,副结核病已成为我国牛场面临的重要传染病之一.为了加强对副结核的病原研究,我们对皮肤迟发性过敏反应(SDTH)、酶联免疫吸附试验(ELISA)、PCR均检测为阳性的牛2头、临床上表现出较强拉稀症状的牛7头,共9头牛进行了副结核分枝杆菌的分离研究.根据副结核分枝杆菌的抗酸特性,采用化学处理与抗生素处理法相结合,成功探索得到一种既能够抑制样本中杂菌生长,又能够保持样本中副结核分枝杆菌活性的方法.通过该方法,从两个不同牧场分离得到4株副结核分枝杆菌.对分离菌进行副结核分枝杆菌基因组IS1311特异性片段酶切验证,证实4个分离株均为S型副结核分枝杆菌,分别命名为pTB-SD-01,pTB-SD-02,pTB-SD-03,pTB-SD-04.为探索副结核分离株的动物感染特性,本研究将副结核分枝杆菌分离株pTB-SD-01、pTB-SD-03,以及副结核分枝杆菌标准弱毒参考株316F、强毒参考株株Ⅲ-Ⅴ,分别感染C57B/L小鼠,在不同时间点检测小鼠外周血中IL-6、IL-10、IFN-γ以及β-actin等细胞因子的转录变化情况;通过ELISA方法检测副结核分枝杆菌抗体消长的情况,从细胞免疫与体液免疫两个方面全面分析不同毒力副结核分枝杆菌感染动物的生物学特性,初步建立了副结核分枝杆菌动物感染模型.
- 作者：
- 彭永
- 学位授予单位：
- 中国兽医药品监察所
- 专业名称：
- 预防兽医学
- 授予学位：
- 硕士
- 学位年度：
- 2018年
- 导师姓名：
- 丁家波
- 中图分类号：
- S852.61
- 关键词：
- 副结核病；副结核分枝杆菌分离；流行病学调查；动物感染模型
- Paratuberculosis； Isolation of MAP； Epidemiological investigation； Animal mode