原核表达宿主的筛选研究
The Screening Study of Prokaryotic Expression Host Strain
对500余株从海水及海泥中筛得的细菌进行抑菌活性及蛋白酶活力测定,筛选出抑菌活性高并且产蛋白酶活力低的优秀菌株.将筛选出的菌株与本实验室保存的野生型枯草芽孢杆菌(Bacillussubtilis)HS-A38进行比较,最终确定出最为优秀的菌株做为原核表达的宿主菌株,导入重组质粒pHT43-SjLys,并进行转化条件的优化.选用8.51kb的大质粒进行电转化,可为分子量较大的重组质粒的高效电转化、以野生型芽孢杆菌为宿主进行高效电转化、其他野生型细菌的转化以及为建立适合工业应用的分泌型原核表达宿主提供参考.利用金黄色葡萄球菌(Staphylococcu saureuus)、溶壁微球菌(Micrococcus lysodeikticus)、假铜绿单胞菌(Pseudomonas aeruginosa)、副溶血性弧菌(Vibrio parachaemolyticus)作为抗菌活性指示菌,检验菌株的抑菌活性.采用福林酚法测定菌株产蛋白酶活力.以筛选出的抑菌活性高、产蛋白酶活力低的菌株作为宿主菌株,采用电转化法导入重组质粒pHT43-SjLys,研究转化效果.以最优菌株作为宿主菌株,做电转化条件的优化.研究不同转化电压、涂板转化产物浓度和质粒与感受态的共同培养时间对质粒转化效率的影响.最为适宜作为原核表达宿主菌株的菌株为枯草芽孢杆菌HS-A38.优化后的电转化方法适合枯草芽孢杆菌HS-A38的转化,转化率可达3633 CFU/μgDNA.转化子进行菌落PCR检验转化效率,阳性概率可达89.3%.枯草芽孢杆菌HS-A38菌株的最优电转化电压为2 KV、涂板时转化产物含量为16.7%、质粒与感受态细胞共同培养时间为1.5 h.
- 作者：
- 邹丹
- 学位授予单位：
- 大连工业大学
- 专业名称：
- 微生物学
- 授予学位：
- 硕士
- 学位年度：
- 2014年
- 导师姓名：
- 刘志文；丛丽娜
- 中图分类号：
- Q78
- 关键词：
- 枯草芽孢杆菌；转化方法；转化率；感受态细胞
- Bacillus subtilis; transformation approach; transformation efficiency; competent cell;