海参肠道中益生菌的筛选及鉴定
Screening and Identification of Probiotics in the Sea Cucumber Intestine
目前,海参养殖已成为我国北方最大的海水养殖种类之一.但水产动物病害频繁发生及抗生素类药物滥用是阻碍养殖规模扩大的关键原因.在水产养殖中寻找高效、安全、无残留的养殖动物用药代替品已迫在眉睫.因此,由改善肠道菌群、促进动物健康的益生菌制成的饵料添加剂逐渐受到重视.海洋养殖环境的多样性与独特性造就了其微生物自身独到的优越性,从海参肠道内选育益生菌株是研究和开发海参专用益生菌添加剂的先决条件.本研究从大连海域的海参肠道中筛选益生菌.经耐酸、耐盐试验,溶钙圈筛选,抑菌试验,得到-株乳酸菌HS-R9;经对海参肠道中酵母菌的筛选,采用苯酚硫酸法测定酵母菌胞外多糖含量,得到两株海参肠道高产胞外多糖酵母菌HS-J4和HS-J9.对乳酸菌HS-R9进行形态学鉴定和16S rDNA序列分析.初步鉴定为植物乳杆菌(Lactobacillus plantarum),现已将该序列提交至GenBank,检索号为KF668239.对酵母菌HS-J4和HS-J9进行形态学鉴定和26S rDNA序列分析.初步鉴定HS-J4为胶红酵母(Rhodotorula mucilaginosa),鉴定 HS-J9 为季也蒙假丝酵母(Meyerozyma guilliermondii),现已将这两株菌的序列提交至GenBank,检索号分别为KF668240和KF668241.采用苯酚-硫酸法和响应面法对两株高产菌株进行胞外多糖测定及发酵条件优化.通过单因素试验确定了 pH、接菌量和发酵时间3个主要因素对发酵产糖量的影响,根据Box-Behnken中心组合设计原理确定显著性因子的最佳水平,并以胞外多糖产量为响应值,应用Design expert 8.0软件进行回归分析,最后通过实际试验进行验证.结果表明:当pH为6.5,接菌量4%,发酵时间39 h时,HS-J4的胞外产糖量最大,为0.560 mg/mL,比优化前的产胞外多糖量(0.474 mg/mL)提高了 18.10%;当pH为6.6,接菌量4%,发酵时间41.3 h时,HS-J9的胞外产糖量最大,为0.762 mg/mL,比优化前的产胞外多糖量(0.616 mg/mL)提高了 23.67%.上述研究结果将为水产饲用益生菌的应用与开发奠定基础.
- 作者：
- 高鹏
- 学位授予单位：
- 大连工业大学
- 专业名称：
- 微生物学
- 授予学位：
- 硕士
- 学位年度：
- 2014年
- 导师姓名：
- 丛丽娜
- 中图分类号：
- S917.1
- 关键词：
- 海参；益生菌；胞外多糖；响应面
- Sea cucumber; Probiotics; Exopolysaccharides; Response surf ace method;