细胞自噬对圆红冬孢酵母油脂积累的影响
The Influence of Autophagy on LipidAccumulation in Rhodosporidium toruloides
面对日益严峻的能源危机、环境污染等世界性的问题,各国研究人员不断开发可再生能源和环境友好型燃料.其中基于生物质转化生产的生物柴油是最为理想的可再生燃料之一.微生物在营养限制条件下会同时发生细胞自噬和油脂过量积累,细胞自噬和油脂过量积累两个细胞进程间的相互影响及其机制成为了近期研究的热点.虽然不少学者通过对基因过表达和基因敲除等基因功能研究发现,非产油酵母模式菌株-酿酒酵母的油脂积累和细胞自噬存在正相关性,但油脂过量生产的产油酵母中细胞自噬和油脂过量积累间是否存在相互作用,以及其规律等,还有待研究.为了研究细胞自噬和油脂积累的关系,本论文通过构建RNA 干扰载体,经过农杆菌介导转化的方法对圆红冬孢酵母(Rhodosporidium toruloide.s)NP11的自噬相关基因ATG8、ATG8、进行基因敲降,获得工程菌株 A9-1,A9-2,A9-3、A8-1、A8-2.经 RT-PCR证明目的基因在转录水平显著降低.通过细胞自噬体染色的方法证明自噬功能受到抑制.同时,对工程菌株进行油脂含量分析发现,和出发菌株相比,油脂含量显著降低,由65%左右下降到40%左右.另一方面为了研究油脂合成对细胞自噬的影响,针对油脂合成途径中的关键基因FAS1进行RNAi载体的构建和转化,对其进行基因敲降,得到工程菌株F-1,F-2,并通过证明目的基因在转录水平显著降低,通过细胞自噬体染色的方法证明自噬功能受到抑制,而且油脂含量比自噬基因敲降的工程菌株也明显下降,由65%左右下降到20%左右.整合匕述实验结果可以得出结论,在圆红冬孢酵母中自噬活动的减弱会影响油脂的积累,而油脂的积累功能抑制会导致自噬功能减弱,两者间存在相互影响.
- 作者：
- 刘洪迪
- 学位授予单位：
- 大连工业大学
- 专业名称：
- 生物学
- 授予学位：
- 硕士
- 学位年度：
- 2017年
- 导师姓名：
- 王际辉；赵宗保；张素芳
- 中图分类号：
- Q93
- 关键词：
- 圆红冬孢酵母；细胞自噬；油脂合成；油脂积累
- Rhodosporidium toruloides； autophagy； lipid synthesis； lipid accumulation