D-塔格糖生产菌的筛选和分类鉴定
Screening . and Identification of The Strains forD-tagatose Producing
D-塔格糖属于己酮糖,在自然环境中存在量极少,它的甜度类似于蔗糖,但热量极低,同时对于预防各类牙龈疾病、改善肠道菌群、降低血糖及抵抗衰老都有显著作用,属于功能性稀有糖的一种,其在食品、医药领域的应用逐渐得到人们的关注和青睐.因此,筛选出具有高产D-塔格糖活性的优良菌株,对于推进D-塔格糖的技术开发和绿色工业化进程具有重要意义.本研究首先通过间苯二酚法建立了 D-塔格糖含量快速检测的方法,然后从不同地区采集的样品中进行菌株的初步筛选,并通过复筛得到具有生产D-塔格糖能力的菌株.对得到的D-塔格糖生产菌进行培养形态特征、生理生化特征、化学特征和分子特征等多个方面的实验,实现筛选菌株的分类鉴定.实验结果如下:通过实验建立了 D-塔格糖定量检测的间苯二酚法,确定了方法的检测条件:检测波长400 nm,加热时间20 min,冷却时间5 min,间苯二酚显色剂浓度1 mg/mL.方法在D-塔格糖浓度6.66-60 μg/mL之间线性关系良好,相关系数0.9999,加标回收率100.38%,相对标准偏差2.08%.为复筛阶段D-塔格糖的定性定量提供了高效快速、灵敏准确的检测手段.从采集的各类样品中筛选获得了1株具有生产D-塔格糖活性的菌株D-tagl,D-半乳糖的底物浓度为0.5 mol/L时,可以转化出0.2 mol/L的D-塔格糖.间苯二酚法检测结果与高效液相色谱法一致,表明了检测方法的可靠性.通过分类鉴定实验,确定菌株D-tagl菌落为乳白色圆形,外观饱满形状规则,光滑湿润且有光泽;革兰氏阳性菌;菌体为杆状,长1-1.5 μm,宽0.5-0.6 μm.通过16SrRNA序列比对分析,其属于乳杆菌属(Lactobacillus),与模式菌株Lactobacillus brevis ATCC14869的相似比为99.67%.最适生长条件:pH6.0,温度37℃,不耐盐;其他各项生理生化鉴定结果与模式菌株基本一致.主要磷脂组分为磷脂酰乙醇胺(PE)、磷脂酰胆碱(PC).DNA的(G+C)mol%含量为43.31%.基于多项分类鉴定结果,菌株D-tag 1为乳杆菌属短乳杆菌的一个亚种,命名为Lactobacillus brevis D-tag1.
- 作者：
- 赵东莹
- 学位授予单位：
- 大连工业大学
- 专业名称：
- 生物学
- 授予学位：
- 硕士
- 学位年度：
- 2017年
- 导师姓名：
- 张春枝
- 中图分类号：
- Q93
- 关键词：
- D-塔格糖；间苯二酚；筛选；分类鉴定
- D-tagatose； resorcinol； screening； classification and identification