产生物活性物质及溶菌酶的海洋微生物筛选和鉴定
海洋生物于低温、高盐、高压、寡营养的特殊环境中生存,正因为其生存环境的特殊性,才使得生活在海洋中的微生物在生理性状和遗传背景方面的不同,使其能产生结构新颖的活性物质,这揭示了开发海洋微生物的巨大潜力.本课题的研究主要从大连海域的海水、海泥和海参养殖圈的海水、底泥样品中筛选出生物活性物质和溶菌酶产量较高的海洋微生物,并且对这些微生物进行鉴定,对它们产生的活性物质进行初步研究.研究结果如下:(1)从辽宁大连海域的海水、海泥的样品中分离共得到38株海洋放线菌.以金黄色葡萄球菌、溶壁微球菌为指示菌,采用牛津杯法初步筛选出抑菌活性较高的海洋放线菌9株.在初筛的基础上,经传代培养后进行复筛,最后得到抑菌活性高的海洋放线菌两株,分别命名为HS-B31和HS-B34.(2)对菌株HS-B31和HS-B34进行基因组DNA的提取、纯化和回收,大肠杆菌DH5α细胞感受态的制备与转化,菌落PCR和质粒的提取验证片段大小,再经16SrDNA测序和构建系统发育树分析.结果显示,菌株HS-B31(Streptomyces sundarbnsensis)和HS-B34(Streptomyces chumphonensis)都属于放线菌目、链霉菌属的不同种.(3)对菌株HS-B31和HS-B34发酵上清液进行萃取、粗提和浓缩,得到有抑菌活性的粗提物B31和B34.经薄层层析分析后,用制备型层析硅胶板对粗提物B31和B34中的活性物质进行分离,共得到八个单体组分,即B31-1、B31-2、B31-3、B31-4、B31-5和B34-1、B34-2、B34-3.再用滤纸片法对得到的单体组分进行抑菌活性的测定.结果发现,单体组分B31-3和B34-3不仅对革兰氏阳性菌金黄色葡萄球菌有较好的抑菌作用,而且对海洋致病菌革兰氏阴性菌副溶血性弧菌也显示出较强的抑菌效果.(4)从辽宁大连海域的海水、海泥和海参养殖圈海水、底泥的样品中分离共得到1540株细菌菌株.以金黄色葡萄球菌、溶壁微球菌、副溶血性弧菌和铜绿假单胞杆菌为指示菌,初步筛选出抑菌活性较高的细菌菌株64株.在初筛的基础上,经传代培养后用滤纸片法进行复筛,最后得到抑菌活性高的细菌菌株28株.再对28株菌株的发酵上清液进行溶菌酶含量的测定,结果显示,菌株HS-C261的产量相对最高,溶菌酶产量为418.4 U/mL.对菌株HS-C261进行基因组DNA的提取、纯化和回收,大肠杆菌DH5α细胞感受态的制备与转化,菌落PCR和质粒提取验证片段大小,再经16S rDNA测序及构建系统发育树分析,结果表明菌株HS-C261为高地芽孢杆菌(Bacillus altitudinis).
- 作者：
- 王艺颖
- 学位授予单位：
- 大连工业大学
- 专业名称：
- 生物学
- 授予学位：
- 硕士
- 学位年度：
- 2017年
- 导师姓名：
- 丛丽娜
- 中图分类号：
- Q93
- 关键词：
- 海洋放线菌；抑菌活性物质；分离纯化；高地芽孢杆菌；溶菌酶
- Marine actinomycetes； Antibacterial activity substance； Separation and purification； Bacillus altitudinis； Lysozyme