产前应用维甲酸对大鼠先天性膈疝模型肺组织VEGF和ET表达的影响及意义
目的:研究血管内皮生长因子(VEGF)及内皮素(ET)在大鼠先天性膈疝(CDH)模型胎肺组织中的表达情况,探讨CDH模型肺发育不良及肺动脉高压的可能机制.探讨产前应用维甲酸对先天性膈疝动物模型肺发育及肺动脉高压的影响及意义.方法:20只成年雌性S-D大鼠随机分为4组(每组5只):1.正常对照(NORMAL CONTROL)组;2.维甲酸对照(RA CONTROL)组;3.膈疝生理盐水(CDH NS)组;4.膈疝维甲酸(CDH RA)组.定时配种后,于配种后第9.5天正常对照组和维甲酸对照组每只予1ml橄榄油灌胃,其余两组每只予100mg Nitrofen溶入1ml橄榄油中灌胃.配种后第18.5天,正常对照组和膈疝生理盐水组每只腹腔注射生理盐水1ml/d;维甲酸对照组和膈疝维甲酸组每只腹腔注射维甲酸5mg/Kg/d.配种后第21.5天在乙醚吸入麻醉下将所有孕鼠行剖宫产,剖出胎鼠处死后,取出两侧肺组织,分别记录肺重和体重,观察胎鼠有无膈疝,然后将肺组织切片固定,HE染色检测各组肺组织PAA、MTBD、MWT及RAC;并将肺组织进行血管内皮生长因子及内皮素免疫组化染色和图像分析,对胎鼠胎肺血管内皮生长因子及内皮素进行定位、定量分析,所得数据进行统计学分析.结果:配种未成功2只,正常对照组4只,共产仔36只,均无膈疝形成.维甲酸对照组4只,共产仔38只,均无膈疝形成.CDH NS组5只,共产仔43只,有膈疝形成者21只,致畸率48.8%.CDH RA组5只,共产仔49只,有膈疝形成者18只,致畸率36.7%,膈疝维甲酸组膈疝发生率明显低于膈疝生理盐水组(P<0.05).各膈疝组肺重与体重之比(LW/BW)均小于对照组,其差异均有统计学意义(P<0.05).对照组中,正常对照组和RA对照组间LW/BW差别没有统计学意义(P>0.05).CDH组中,NS组和RA组间LW/BW差别没有统计学意义(P>0.05).正常对照组和维甲酸对照组肺泡结构明显,腺泡大,肺泡间隔薄而均匀,呼吸性支气管末端呈囊泡状;肺小动脉管壁薄,管腔大;膈疝生理盐水组肺泡少而小,间隔增厚,支气管末端少见囊泡状结构,肺泡、肺泡管、肺泡囊呈假腺体期改变,肺小动脉肌层增厚,官腔狭小;膈疝维甲酸组介于正常对照组与膈疝生理盐水组之间.图像分析及数据统计结果显示:膈疝生理盐水组RAC(2.1±0.2)明显低于正常对照组(4.4±0.3)(P<0.05);应用维甲酸后RAC(4.2±0.3)明显升高,接近正常对照组(P<0.05).膈疝生理盐水组MTBD(8.1±1.9)和MWT(65.49±9)明显高于正常对照组(MTBD:4.36±1.06;MWT:40.29±6)(P<0.05),应用维甲酸后MTBD(5.3±1.8)和MWT(45.71±8)明显降低,接近正常对照组(P<0.05).膈疝生理盐水组PAA(46.23±4)明显低于正常对照组(53.87±3)(P<0.05);应用维甲酸后其PAA(50.46±4)明显升高(P<0.05).血管内皮生长因子主要在血管内皮细胞呈阳性表达,其中维甲酸对照组表达最强,正常对照组次之,膈疝生理盐水组表达最弱,膈疝维甲酸组表达介于正常对照组和膈疝生理盐水组之间.内皮素在胎鼠肺血管内皮细胞和平滑肌、细支气管粘膜上皮和平滑肌,肺泡上皮均呈阳性表达,其中,膈疝生理盐水组表达最强,维甲酸对照组表达最弱,正常对照组内皮素表达接近维甲酸对照组,膈疝维甲酸组表达介于膈疝生理盐水组和正常对照组之间.结论:1.Nitrofen诱导的CDH大鼠模型存在VEGF和ET的表达异常,但其确切机制需进一步研究证明.2.维甲酸不仅可以降低膈疝的发生率,还能明显改善先天性膈疝大鼠模型的肺组织发育不良,使肺血管壁及支气管壁变薄,增大血管官腔,起到治疗肺发育不良及肺动脉高压的作用.3.维甲酸能降低内皮素在肺组织中的表达强度以及提高血管内皮生长因子的表达强度.维甲酸可能是通过调节胎肺组织中VEGF与ET的表达发挥作用.但VEGF和ET与CDH时肺组织的发育异常的关系非常复杂,三者间的实际联系及相互作用机制还有待进一步研究分析.
- 作者：
- 孙滨
- 学位授予单位：
- 首都儿科研究所
- 专业名称：
- 儿科学
- 授予学位：
- 硕士
- 学位年度：
- 2017年
- 导师姓名：
- 马立霜
- 中图分类号：
- R-332；R726.5
- 关键词：
- 维甲酸；先天性膈疝；血管内皮生长因子；内皮素；肺发育不良；肺动脉高压
- Retinoic Acid； Congenital diaphragmatic hernia； Endothelial growth factor； Endothelin； Pulmonary hypoplasia； Pulmonary hypertention