基于pH调制的生物碱全二维液相色谱分析方法研究
Study on the Analysis Method of Alkaloid by Comprehensive 2D-LC with pH Modulation
生物碱是一类重要的天然化合物,是药用植物的有效成分之一.大多数生物碱具有显著的生理活性和药理作用,比如抗肿瘤、抗炎、降血压、抗病毒等作用.近几年用于临床的生物碱药品已达百种.由于生物碱有其独特的功效,因此对生物碱的研究开发引起了人们的广泛关注.有关生物碱的分离和分析方法文献上已有许多报道,如薄层色谱法、气相色谱法、液相色谱法、高效液相色谱法等.生物碱通常存在于复杂的植物体系中且含量较低,面对这样一个复杂体系,一维色谱有限的峰容量、分辨率和选择性很难实现对生物碱的高效分离分析.比较之下,二维甚至多维色谱成为解决中药复杂物质体系的强有力的工具之一.本文以中国传统药材延胡索,夏天无和附子中总生物碱为研究对象,成功的建立了一种基于p H调制的二维液相色谱(2D-LC)分析生物碱的方法,实现了生物碱成分的高效分离.利用液相色谱-质谱法(LC-MS)对三种药材中的主要化合物进行结构鉴定,根据对照品的质谱信息,并结合文献比对来确定生物碱化合物.旨在为从天然药物中寻找和发现新化合物提供新的途径.本研究主要内容及结果如下:1.延胡索总生物碱的二维液相色谱分析方法研究.建立一种基于p H调制的全二维(2D)反相色谱(RP*RP)方法分析延胡索中的生物碱成分.第一维色谱采用甲醇和0.5%氨水缓冲液为流动相及耐强碱反相(RP)色谱柱进行分离,获得的峰容量为94;选用乙腈和0.1%甲酸缓冲液为流动相及阳离子交换色谱柱进行第二维分离,获得的峰容量为205;全二维液相色谱在延胡索总生物碱中总峰容量达到9090,提取物中的16个化合物通过UV和MS比对进行结构鉴定,确定化合物分别为Tetrahydroprotopapaverine(1)、13-甲基去氢延胡索胺(2)、去氢紫堇碱(3)、去甲基紫堇单酚碱(4)、黄连碱(5)、非洲防己碱(6)、四氢非洲防己胺(7)、13-甲基巴马士宾(8)、普鲁托品(9)、d-海罂粟碱(10)、去氢紫堇鳞茎碱(11)、dl-四氢巴马亭(12)、巴马亭(13)、氢化小檗碱(14)、dl-四氢黄连碱(15)和蓝堇辛(16).2.夏天无总生物碱的二维液相色谱分析方法研究.采用同样的方法分析夏天无中的生物碱成分.采用0.6%氨水缓冲液和乙腈为流动相及耐强碱反相(RP)色谱柱进行第一维色谱分离,获得的峰容量为236;采用乙腈和0.5%甲酸缓冲液为流动相和阳离子交换色谱柱进行第二维色谱分离,获得的峰容量为88;全二维液相色谱在夏天无总生物碱中总峰容量达到6925,提取物中的24个化合物通过UV和MS比对进行结构鉴定,确定化合物分别为氢化小檗碱(1)、毕枯枯灵(2)、小檗碱(3)、紫堇碱(4)、黄连碱(5)、药根碱(6)、四氢药根碱(7)、斯阔任碱(8)、普鲁托品(9)、d-海罂粟碱(10)、去氢紫堇球碱(11)、dl-四氢巴马亭(12)、巴马亭(13)、隐品碱(14)、罂粟碱(15)、蓝堇辛(16)、球紫堇碱(17)、α-别隐品碱(18)、紫堇尔明(19)、隐品巴马汀(20)、夏无宁碱(21)、13-甲基去氢延胡索胺(22)、四氢黄连碱(23)和13-甲基巴马士宾(24).3.附子总生物碱的二维液相色谱分析方法研究.利用同样的方法分析附子中的生物碱成分.以甲醇和0.5%氨水缓冲液为流动相,采用耐强碱反相(RP)色谱柱进行第一维色谱的分离,获得的峰容量为141;再以甲醇和0.1%甲酸缓冲液为流动相,采用阳离子交换色谱柱进行第二维色谱的分离,获得的峰容量为131;全二维液相色谱在附子总生物碱中总峰容量达到5700,提取物中的10个化合物通过UV和MS比对进行结构鉴定,分别为senbusine A(1)、9-hydroxysenbusine(2)、14-dehydro-19-oxodelcosin(3)、8-OEt-14-benzoylmesac Onitine(4)、Mesaconitine(5)、Hypaconine(6)、Neoline(7)、Delsoline(8)、N-deethyl-14-benzoylaconine(9)、14-acetylkarakoline(10).
- 作者：
- 魏小东
- 学位授予单位：
- 塔里木大学
- 专业名称：
- 生物化学与分子生物学
- 授予学位：
- 硕士
- 学位年度：
- 2017年
- 导师姓名：
- 刘文杰
- 中图分类号：
- R284；O657.72
- 关键词：
- 全二维液相色谱；生物碱；pH；延胡索；夏天无；附子
- Comprehensive two-dimensional liquid chromatography; Alkaloid; pH; Corydalis yanhusuo W.T.Wang; Corydalis decumbens(Thunb.) Pers.; Aconitum carmichaeli Debx;