冠突散囊菌固体发酵及其次级代谢产物影响因素的研究
The Study on the Influence Factors of Solid Fermentation and the Secondary Metabolites of Eurotium Cristatum
冠突散囊菌(Eurotium cristatum)是茯砖茶在加工过程中"发花"工艺的优势菌,并且具有较好的抗氧化、抑菌和抗肿瘤等功能,但是这些功能研究主要基于液体培养和纯培养发酵.为了更深入的研究冠突散囊菌的次级代谢产物及活性,论文探究了糖、氨基酸、无机盐因素对冠突散囊菌发酵的影响,并同时进行了冠突散囊菌与细菌、真菌及植物内生菌混合发酵产物影响的研究.后续对其发酵产物进行化学成分分离和结构鉴定,获得的单体化合物进行初步的细胞毒活性评价,为筛选抗肿瘤活性天然药物提供理论基础.通过碳源、氮源和无机盐因素对冠突散囊菌发酵的影响研究得出,在蛋氨酸3 g/L、CaBr2200 mM和NacL 100 mM条件影响下发酵产物活性较强.以及采用冠突散囊菌(E.cristatum)与金黄色葡萄球菌(Staphylococcus aureus)、地衣芽孢杆菌(Bacillus licheniformis)、肺炎链球菌(Streptococcus pneumoniae)、枯草芽孢杆菌(Bacillus Subtilis)、烟曲霉(Aspergillus fumigatus)、黄曲霉(Aspergillus flavus)进行共培养研究可知,共培养与纯培养冠突散囊菌发酵产物相比有差异显著性,由此为研究共培养产物的单体化合物提供实验基础,为挖掘活性次级代谢产物提供有利来源.并采用硅胶柱、凝胶柱和高效液相色谱等方法对冠突散囊菌与金黄色葡萄球菌固体混合发酵提取物进行分离纯化,从中分离鉴定了7个化合物,分别为echinulin(1),cristatumin F(2),neoechinulin A(3),preechinulin(4),flvoglaucin(5)和tetrahydroauroglaucine(6),epiheveadride(7).抗肿瘤活性结果表明,7个化合物对4种肿瘤细胞株均具有不同程度的细胞毒活性,化合物(3)、(5)和(7)对肝癌Bel-7402细胞毒活性较强,并且发现化合物6和7目前为止并未有文献报道分离于纯培养的冠突散囊菌中,故共培养途径是拓宽次级代谢产物的来源之一.同时论文从一株山楂Crateagus Pinnatifida Bge根部分离的植物内生真菌,并通过形态学和分子生物学rDNAITS序列分析鉴定菌株为拟茎点霉Phomopsis mali.并从拟茎点霉固体发酵提取物中分离纯化了4个化合物,分别为交链孢酚单甲醚(8)、交链孢酚(9)、3-hydroxy-5,4′-dimethoxy-6′-methyl-6H-benzo[c]chromen-7-one(10)、(Z)-10-nonadecenoic acid(11).细胞毒活性评价得出9和11对4种肿瘤细胞株均具有不同程度的细胞毒活性,9对肺癌A549和乳腺癌MCF-7细胞毒活性较强,11对肺癌A549细胞毒活性较强.并进行了冠突散囊菌与拟茎点霉的共培养研究,结果显示,共培养与纯培养冠突散囊菌HPLC谱图不一,为后续研究共培养代谢产物提供实验基础.
- 作者：
- 杨娟娟
- 学位授予单位：
- 塔里木大学
- 专业名称：
- 微生物学
- 授予学位：
- 硕士
- 学位年度：
- 2016年
- 导师姓名：
- 陈伟
- 中图分类号：
- TQ920.1
- 关键词：
- 冠突散囊菌；混合发酵；次级代谢产物；细胞毒活性
- Eurotium cristatum; Co-culture; Secondary metabolites; Cytotoxic activity;