产胞外多糖乳杆菌的筛选及多糖功能的研究
本论文以大连海域所产的虾夷扇贝、鸦片鱼、多宝鱼等海产品为实验材料,采用选择性培养基MRS从海产品消化道分离获得革兰氏染色阳性、接触酶阴性的菌株,采用苯酚-硫酸法测定分离所获得菌株的发酵液中所产胞外多糖的含量,筛选出胞外多糖产量相对较高的乳杆菌,并通过研究菌体及所产多糖的抗氧化性和胞外多糖抑制E.coE.黏附作用,筛选出目标菌株,进而对其胞外多糖进行提取纯化及相对分子量测定,研究纯化后的胞外多糖组分的抗氧化作用.研究结果如下:1.从海产品消化道分离获得的21株疑似乳杆菌中,相对高产胞外多糖的菌株编号为4号菌、12号菌、49号菌,经16S rRNA序列测定鉴定为Lactobacillus plantarum subsp.plantarum-4,Lactobacillus plantarum-12,Lactobacillus plantarum subsp.plantarum-49,其胞外多糖的产量分别为 589.21±3.12mg/L、631.10±5.26mg/L、617.32±10.07mg/L;2.对3株植物乳杆菌及其EPS进行抗氧化活性研究,Lactobacillus plantarum-12乳杆菌及其EPS具有最高的清除DPPH自由基的能力.当EPS浓度为0.50mg/ml时,其多糖清除DPPH自由基的能力达到48.82±3.88%;EPS浓度为0.3mg/ml时,其多糖清除DPPH自由基的能力达到28.33±5.71%;3.菌株 Lactobacillus plantarum-12,Lactobacillus plantarum subsp.plantarum-49及LGG所产EPS可不同程度抑制E.coli ATCC25922在HT-29细胞上黏附.Lactobacillus planntarum-12的EPS的抑制E.coli粘附效果显著高于其他两株菌(p<0.05);当其EPS的浓度为0.20mg/ml时,对E.coli ATCC25922在HT-29细胞上的抑制粘附率为78.23%;4.通过 ELISA 方法研究菌株 Lactobacillus plantarum-12 的 EPS 对 E.coli ATCC25922刺激HT-29细胞分泌IL-8、IL-10的作用,Lactobacillusplantarum-12和LGG的多糖可显著降低(p<0.05)E.coli刺激HT-29细胞产生炎性因子IL-8的水平,Lactobacillus plantarum-12和LGG的不同浓度多糖对HT-29细胞表达IL-10与对照组相比无显著作用(p>0.05);5.Lactobacillus plantarum-12的发酵液经煮沸、乙醇沉淀、离心、透析、冷冻干燥后得到粗多糖,粗多糖经DEAE-Sepharose Fast Flow离子交换层析得到中性糖组分EPS1和酸性糖组分EPS2,中性糖组分EPS1经Sephacryl HR S200凝胶柱进一步纯化,酸性糖组分EPS2经Sepharose C1-6B凝胶柱进一步纯化,获得2种分子量大小不同的均一组分.采用在SepharoseCL-6B凝胶柱上测定标准品的洗脱体积与相对分子质量的标准曲线,进而测定两均一组分在同等条件下的洗脱体积,得到两组分的相对分子质量分别为8.5*104Da 和 7.4*104Da.以上结果表明Lactobacillus plantarum-12具有产EPS的能力,其EPS具有潜在的益生功能,对其粗多糖进行纯化并测定分子量,为多糖组成和结构的研究提供基础数据.
- 作者：
- 董阳勤
- 学位授予单位：
- 大连工业大学
- 专业名称：
- 食品工程(专业学位)
- 授予学位：
- 硕士
- 学位年度：
- 2016年
- 导师姓名：
- 牟光庆；陈历俊
- 中图分类号：
- TS254.1
- 关键词：
- 胞外多糖；抗氧化性；粘附性；IL-8；纯化
- Exopolysaccharides； Antioxidant activities； Adhesion； IL-8； Purification