副溶血性弧菌中密度感应系统依赖的T6SS1调控机制研究
副溶血弧菌(Vibrio parahaemolyticus,VP)存在于海洋环境中的一种革兰氏阴性菌.VP菌广泛存在于海水、海底沉积物以及多种海洋生物中,具有致病性.在中国,大量人群由于食用未经加工或为半生的海产品,会引发由VP菌引起的肠胃炎,临床症状为呕吐、腹泻、高热等.部分人群由于身体表面创伤接触VP污染的海水或者海产品,还会引起伤口感染和原发性败血症.密度感应系统(quorum-sensing,QS)是细菌之间进行信号交流的方式,其核心调控子OpaR和AphA分别在高菌密度和低菌密度下高表达,并呈反向交互式浓度梯度变化,OpaR和AphA间存在复杂的相互作用和协同效应机制,紧密地控制着副溶血弧菌关键毒力基因在低菌密度下高表达,并随菌密度的升高而降低.副溶血弧菌T6SS1基因簇是位于大染色体上,是由29个基因组成的7个操纵子(VP1386-1414),选择T6SS1基因座位中所有操纵子中首个基因作用研究的靶基因,即T6SS1的靶基因为VP1388、VP1393、VP1400和VP1409.本研究前期分别构建AphA、ToxR和OpaR基因突变株,并通过重组获得了His-AphA、His-ToxR和His-OpaR的重组蛋白,经过引物延伸实验、实时定量PCR、凝胶阻滞实验、DNase I足迹实验,深入探究QS系统核心调控子Ahp A和OpaR调控T6SS1基因转录的精细分子机制.获得如下结果:1.AphA对VP1388、VP1393、VP1400和VP1409基因的转录具有间接负向调控作用,从而抑制T6SS1的转录.2.ToxR能直接与3个靶基因的启动子区结合,分别为VP1393、VP1400和VP1409,直接负向调控T6SS1的转录.3.OpaR直接结合3个靶基因的启动子区,分别为VP1388、VP1400和VP1409,对T6SS1的转录具备负向调控作用.4.T6SS1在低菌密度下高表达,主要在细菌感染的前期发挥作用,促进对其他细菌的抑制作用,协助副溶血弧菌与其它细菌竞争.
- 作者：
- 董新波
- 学位授予单位：
- 安徽农业大学
- 专业名称：
- 作物生物技术
- 授予学位：
- 硕士
- 学位年度：
- 2015年
- 导师姓名：
- 谢传晓；周冬生
- 中图分类号：
- R378
- 关键词：
- 副溶血性弧菌；密度感应；六型分泌系统Ⅰ；转录调控
- Vibrio parahaemolyticus； Quorum-sensing； Type Ⅵ secretion； Transcriptional regulation