β-乳球蛋白的制备及其亚硒酸化物的结构研究
本实验旨在研究一种有机硒源,以p-乳球蛋白和二氧化硒为原料,在真空低温条件下合成亚硒酸化p-乳球蛋白,研究在这一反应下蛋白结构的变化.利用傅里叶变换红外光谱(FT-IR)、圆二色谱(CD)、X-射线衍射(X-ray)、核磁共振波谱(NMR)、飞行时间质谱(MALDI-TOF-MS)、双向电泳(2D-PAGE)、差示扫描量热(DSC)等技术研究亚硒酸化p-乳球蛋白的结构变化.首先,对从牛奶中分离纯化p-乳球蛋白的方法硫酸铵分级沉淀、葡聚糖凝胶SephadexG-50柱层析、超滤等进行了研究.结果表明,饱和度为40%-70%的硫酸铵沉淀可以得到含量最多的β-乳球蛋白;SephadexG-50柱层析的最佳条件为:上样浓度20mg/mL,上样量2mL,流速4S/滴;超滤的最适条件为:压力0.25Mpa,超滤时间50min.利用凯氏定氮法、双向电泳技术对p-乳球蛋白的纯度进行测定,其蛋白含量达到92.5%.其次,在真空低温条件下合成亚硒酸化p-乳球蛋白,合成条件为压力-0.1 Mpa,反应时间5h,反应温度40℃C,反应体系pH值为3.最终得到硒含量为15.17mg/g的亚硒酸化β-乳球蛋白.通过FT-IR检测发现与p-乳球蛋白相比,亚硒酸化p-乳球蛋白在878cm-1和1043cm-1处新增较强谱带,分别归属于Se=O和Se-O.最后,研究了亚硒酸化p-乳球蛋白结构的变化.CD色谱结果显示,与p-乳球蛋白相比,亚硒酸化p-乳球蛋白的a-螺旋比例增加9%,β-折叠的比例减少了14.2%,p-转角减少了6%,无规则卷曲增加了11.2%,二级结构发生了很大改变.X-ray结果再次证明了蛋白质二级结构发生改变.DSC结果显示,亚硒酸化β-乳球蛋白的热稳定性降低.NMR分析结果证明三级结构也发生了改变.2D-PAGE显示,亚硒酸化β-乳球蛋白含有两种蛋白,且分子量呈两倍关系,MALDI-TOF-MS进一步分析表明,这两种蛋白的一维肽指纹图谱高度一致,得出亚硒酸在与p-乳球蛋白反应时,一些亚硒酸只与一个p-乳球蛋白相连接,另一些可以连接两个p-乳球蛋白.以上结果说明,在真空低温条件下亚硒酸可以导入β-乳球蛋白,并且蛋白的二级结构和三级结构都发生了改变.为亚硒酸化β-乳球蛋白的功能研究奠定了基础.
- 作者：
- 刘昊雨
- 学位授予单位：
- 天津科技大学
- 专业名称：
- 食品工程(专业学位)
- 授予学位：
- 硕士
- 学位年度：
- 2015年
- 导师姓名：
- 刘安军
- 中图分类号：
- TQ931
- 关键词：
- β-乳球蛋白；亚硒酸；结构研究
- β-lacto globulin； selenious acid； structure research