二甲双胍对过氧化氢所致脑片损伤的作用研究
目的:本研究通过过氧化氢刺激小鼠脑片,建立离体脑片损伤模型,预先给予不同浓度二甲双胍进行干预,探讨二甲双胍对过氧化氢所致脑片的保护作用及其可能的机制.方法:脑片损伤模型的制备及实验分组:选用SPF级昆明种小鼠172只,制备成脑片后分为正常组、模型组、药物低剂量组和药物高剂量组四组:四组分别在37℃通有饱和氧的正常人工脑脊液(normal Artificial Cerebrospinal Fuid,n ACSF)中预孵育30min后;药物组给予不同浓度二甲双胍孵育30min,正常组和模型组正常孵育30min;模型组和药物组转至含过氧化氢的ACSF中孵育60min,正常组正常孵育60min.脑片均孵育120min后进行后续指标的测定.孵育后的脑片用氯化三苯四氮唑(2,3,5-triphenyl tetrazolium chloride,TTC)溶液进行显色、有机溶剂抽提测定溶液吸光度、脑片匀浆后进行乳酸脱氢酶(Lactic Dehydrogenase,LDH)的活性测定、氧化指标总超氧化物歧化酶(Superoxide Dismutase,SOD)、丙二醛(Maleic Dialdehyde,MDA)及谷胱甘肽过氧化物酶(Glutathione Peroxidase,GSH-PX)的测定及定量q PCR(Polymerase Chain Reaction)测定基因PICK1 m RNA的表达情况、Western Blot检测凋亡相关蛋白Bcl-2(B-cell Leukemia/Lymphoma 2)和Bax(Bcl-2 Associated X protein)的表达情况.结果:(1)与正常组相比,模型组和药物组的脑片TTC染色都明显变浅,而药物组与模型组比较,脑片TTC染色明显加深,且高剂量的染色比低剂量深;(2)在490nm处测定吸光度A490nm,模型组与正常组比较(P<0.01),脱色产物明显增加,二甲双胍低剂量组(P<0.05)和二甲双胍高剂量组(P<0.01)的A490nm与模型组比较脱色产物都增加;(3)模型组与正常组比较,模型组(P<0.01)乳酸脱氢酶释放率显著增加,二甲双胍低剂量组(P<0.05)和二甲双胍高剂量组(P<0.05)与模型组比较都减少了,而二甲双胍低剂量组和高剂量组间差异不是很明显;(4)?脑片T-SOD测定结果:与正常组比较,模型组的T-SOD活性显著降低(P<0.01);给药低剂量组(P<0.05)和给药高剂量组(P<0.01)与模型组比较,T-SOD的活性都有升高;?脑片MDA测定结果:与正常组比较,模型组脑片的MDA活性增强(P<0.05);低剂量组(P<0.05)和高剂量组(P<0.01)MDA活性都有所下降;?脑片GSH-PX测定结果:与模型组比较,正常组(P<0.05)和高剂量组(P<0.05)的GSH-PX活性都增加,而低剂量组与模型组比较(P>0.05),不具备统计学意义;(5)PICK1基因m RNA的表达:与正常组比较,模型中的表达明显增加(P<0.01);而经过二甲双胍预处理的脑片组(低剂量组和高剂量组),低剂量组和高剂量组较模型组有所减少(P<0.05,P<0.05),且高剂量组减少较低剂量组多;(6)Bcl-2/Bax的表达:与正常组比较,模型组Bcl-2/Bax的表达明显下降;而经二甲双胍(低剂量组和高剂量组)预处理后,Bcl-2/Bax的表达有所升高.结论:(1)过氧化氢诱导的脑片损伤,而二甲双胍对过氧化氢诱导脑片氧化损伤有一定的保护作用.(2)脑片的氧化损伤可激活PICK1的上调,二甲双胍通过抑制PICK1的表达对过氧化氢所致的脑片损伤有保护作用.(3)二甲双胍可上调凋亡蛋白Bcl-2/Bax的表达从而对过氧化氢诱导的脑片损伤起保护作用.
- 作者：
- 蔡雪洲
- 学位授予单位：
- 湖北科技学院
- 专业名称：
- 药学
- 授予学位：
- 硕士
- 学位年度：
- 2016年
- 导师姓名：
- 蔡飞；甘受益
- 中图分类号：
- R965
- 关键词：
- 脑片；二甲双胍；氧化应激；PICK1；凋亡蛋白
- Brain slices； Metformin； Oxidative stress； PICK1； Apoptosis proteins