刺参胶原纤维简易提取方法及胶原降解酶的特性研究
传统的海参体壁胶原纤维提取方法耗时长,本文采用简化的胶原纤维提取方法,从水洗次数、NaOH溶液洗涤的时间或次数等方面对海参体壁胶原纤维的提取条件进行优化.结果显示,在海参匀浆与洗涤液比例为1:10(m/V)及操作温度为4℃的条件下,去离子水洗涤搅拌3次,每次30 min,0.1 mol/L pH 8.0 Tris-HCl缓冲液(含5mmol/LEDTA, 0.5 mol/L NaCl)洗涤8 h,0.1 mol/L NaOH溶液洗涤24 h,可获得白色的海参体壁胶原纤维.采用红外分析证实该条件下获得的物质为海参胶原纤维,其提取时间由传统的7天缩短为2天.聚丙烯酰胺凝胶电泳(SDS-PAGE)检测得到清晰条带(116~200 kDa),利用液相色谱-质谱(LC-MS/MS)分析法进行测序得到胶原纤维部分序列(Gly-Leu-Pro-Gly-Ala-Arg-Gly-Ser-Asn-Gly-Asn-Asp-Gly-Pro-Ala-Gly-Pro-Arg-Gly-Phe-Asp-Gly-Pro-Glu-Gly-Pro-Arg),与球海胆(Paracentrotus lividus) I型胶原蛋白前体吻合.采用高效液相色谱法对得到的胶原纤维进行氨基酸组成分析,其中甘氨酸含量为32.34%,约占总氨基酸的1/3,脯氨酸和羟脯氨酸含量分别为7.75%,5.10%.利用20 mmol/L pH 9 Tris-HCl(含10mmol/L CaCl2)缓冲液对海参肠浸提,得到海参肠胶原降解酶.明胶酶谱检测其酶学性质:最适温度为40℃,最适pH为9,EDTA-Na2能够完全抑制酶活.海参肠胶原降解酶作用于海参体壁胶原纤维和罗非鱼皮,均有不同程度降解,三氯乙酸(TCA)沉淀法结合Folin-酚法测定可溶性寡肽含量也有所增加.
- 作者：
- 商文慧
- 学位授予单位：
- 大连工业大学
- 专业名称：
- 食品科学
- 授予学位：
- 硕士
- 学位年度：
- 2014年
- 导师姓名：
- 朱蓓薇；吴海涛
- 中图分类号：
- TQ914.2
- 关键词：
- 刺参；胶原纤维；简易提取；胶原降解酶；酶学特性
- Sea cucumber (Stichopus japonicus)； Collagen fibers； Simplified extraction method； Collagen degradation enzyme； Enzymatic property