中药中抑制α-葡萄糖苷酶活性组分的研究
α-葡萄糖苷酶广泛存在于生物体中,不仅是生物体正常运转的关键酶,而且是许多疾病的相关酶.以α-葡萄糖苷酶为靶标,从传统中药中筛选α-葡萄糖苷酶抑制剂,对新药的开发和中药的现代化有着巨大的推动作用.论文根据当前筛选中存在的不足,进行了以下两个实验:以对-硝基苯-a-D-吡喃葡萄糖苷为底物,利用高效液相色谱定量分析水解产物对-硝基苯酚,确定α-葡萄糖苷酶的活性,通过单因素实验,建立了α-葡萄糖苷酶抑制剂的体外筛选模型:10 μL 0.067 mol·L-1, pH 6.8的磷酸盐缓冲溶液或待筛选溶液、30μL0.1U·mL-1 α-葡萄糖苷酶,震荡混匀,37℃孵育20 min,加入40μL 8.0 mmol·L-1 PNPG开启反应,震荡混匀,37℃反应30 min后,加入80 μL 0.2 mol·L-1 Na2CO3终止反应,加超纯水稀释至5001μL,振荡混匀,经0.451μm膜过滤后,用HPLC检测,通过产物PNP的浓度变化,计算a-葡萄糖苷酶的活性.通过Acarbose验证了筛选方法的可靠性,说明该方法微量、准确、灵敏、快速,可降低筛选的假阳性,提高从复杂样品或有色素干扰样品中发现新的活性物质的机率.选择对糖尿病有治疗作用的50味中药,用5种溶剂(正己烷、二氯甲烷、乙酸乙酯、甲醇、水)对50味中药进行系统提取,建立了含有250个提取部位的组分库并应用建立的筛选模型,首次应用高效液相色谱研究了各个提取部位在3个浓度(64、6.4、0.64 mg·mL-1)下的a-葡萄糖苷酶抑制活性.通过筛选,确定了对α-葡萄糖苷酶有较大抑制活性的中药和中药组分,总结了活性组分在中药中的存在规律和性质,为中药资源的开发利用提供了重要的活性数据参考.
- 作者：
- 朱文佳
- 学位授予单位：
- 大连工业大学
- 专业名称：
- 食品科学
- 授予学位：
- 硕士
- 学位年度：
- 2011年
- 导师姓名：
- 朱靖博
- 中图分类号：
- R284
- 关键词：
- 中药；α-葡萄糖苷酶抑制剂；筛选；HPLC；酶动力学
- Traditional Chinese medicine； α-glucosidase inhibitor； screening； HPLC； enzyme kinetic