绞股蓝皂苷糖苷酶的分离纯化及酶性质的研究
本文以酶法转化绞股蓝皂苷为目的,对绞股蓝皂苷糖苷酶的提取、分离纯化、酶学性质、酶反应特异性进行了研究.微生物Absida sp. GYP4r菌经发酵得到的粗酶液,对其进行TLC法分析结果表明该酶具有活性,能将多糖基的绞股蓝皂苷转化为低糖基的绞股蓝皂苷.该酶经DEAE-cellulose DE52离子交换柱纯化后得到纯酶,SDS-聚丙烯酰胺凝胶电泳法测定纯酶的分子质量为68 kDa.酶性质研究结果表明,最适pH为5.0,最适温度为40℃,温度稳定范围为20~60℃,pH稳定范围为2.2-8.0.Na+、K+、Mg2+、Zn2+、Ca2+、Fe3+对该酶无明显作用,Cu2+对其有抑制作用.酶反应动力学研究表明该酶的Vmax为0.46 mmol/(L-h),米氏常数Km为14.20 mmol/L.酶反应特异性研究证明,绞股蓝皂苷糖苷酶对黄酮类无水解作用.对绞股蓝皂苷有水解作用,对穿山龙薯蓣皂苷、黄芪皂苷、白头翁皂苷、柴胡皂苷、人参皂苷Re、朱砂根皂苷没有水解作用.绞股蓝皂苷糖苷酶与pNP系列底物反应结果表明,绞股蓝皂苷糖苷酶能水解pNP-α-D-Gal、 pNP-a-D-Glc、pNP-β-D-Glc,对pNP-β-D-Gal有一定的水解作用,经淀粉酶活力测定表明,绞股蓝皂苷糖苷酶基本上无水解淀粉的能力.
- 作者：
- 毛泽仁
- 学位授予单位：
- 大连工业大学
- 专业名称：
- 发酵工程
- 授予学位：
- 硕士
- 学位年度：
- 2011年
- 导师姓名：
- 鱼红闪
- 中图分类号：
- Q946.5
- 关键词：
- 绞股蓝；绞股蓝皂苷糖苷酶；酶性质
- gynostemma； gypenoside； gypenoside-glycosidase