一株嗜盐杆菌的溶藻特性及其溶藻活性物质的分离纯化
赤潮是全球性的海洋生态灾害问题之一,而其防治研究一直广受关注.海洋溶藻细菌对赤潮藻类有高效的抑制作用,对环境负面影响较小,已成为赤潮防治研究的热点之一,尤其是溶藻活性物质的发现,为赤潮治理提供了新的方法和思路,也是目前研究的难点和要突破的重点.对中肋骨条藻(Skeletonema costatum)具有间接溶藻作用的嗜盐杆菌溶藻菌株(Halobacillus sp.HSQAY1,Gen Bank登录号为JX308828)由本实验室从深圳大鹏湾赤潮爆发海域分离并保藏.本文研究了该嗜盐杆菌的生长特征,胞外溶藻物质的理化特性,并对溶藻物质进行了初步的分离纯化.主要结果如下:(1)采用平板菌落法测定了溶藻细菌HSQAY1的生长曲线,结果显示0-8 h为迟缓期,8-40 h为对数期,40-72 h进入稳定期,72 h后进入衰亡期;迟缓期期间细菌无菌滤液的溶藻作用不显著,而进入对数期后其溶藻作用显著增强,此后溶藻率基本稳定在80.4%~93.4%之间.(2)细菌分别用p H为5.5,6.5,7.5,8.5和9.5的培养基培养48 h后,其无菌滤液的溶藻率分别为20.62%,46.10%,61.14%,62.99%,74.41%,表明弱酸性条件不利于细菌生长或合成分泌溶藻物质,而碱性环境更有利于细菌的生长或溶藻物质的合成分泌;用盐度分别为20,25,30,35,40培养基培养细菌48h,其无菌滤液的溶藻率分别为53.03%,88.13%,87.94%,41.91%和17.25%,表明盐度为25~30时最有利于细菌生长或合成分泌溶藻物质,而盐度过高(盐度为40)则会抑制其生长或溶藻物质的合成.(3)菌株HSQAY1产生的溶藻活性物质在强酸性条件下(p H=3)丧失活性,而p H 5~11时其溶藻率在83.4%~98.4%之间;温度在30~110℃时,其溶藻率在71.7%~94.5%之间,表现出一定的酸碱稳定性和热稳定性;此外,该溶藻物质不受反复冻融(-20℃)的影响.说明溶藻活性物质不耐强酸,但有较好的耐碱性、热稳定性和不受反复冻融影响,有较强的环境稳定性.(4)无菌滤液经乙醇沉淀分离获得的沉淀相具有溶藻活性,溶藻率高达到65.6%,而浸提相无溶藻活性;硫酸铵饱和度为60%~80%时可析出具有显著溶藻活性的粗蛋白沉淀,超滤法获得溶藻活性组分的分子量大于10 k Da,表明该溶藻活性物质可能是一种分子量大于10 k Da的蛋白类物质.(5)硫酸铵沉淀的粗蛋白SDS-PAGE电泳结果显示在15~40 k Da间有3条明显的特异蛋白条带,高效液相色谱(SEC柱)分析结果显示出3个峰,其中可能包含有溶藻活性物质组分.
- 作者：
- 黄珺
- 学位授予单位：
- 上海海洋大学
- 专业名称：
- 渔业
- 授予学位：
- 硕士
- 学位年度：
- 2015年
- 导师姓名：
- 黄洪辉
- 中图分类号：
- X172；X55
- 关键词：
- 嗜盐杆菌菌株HSQAY1；中肋骨条藻；溶藻物质；环境稳定性
- Halobacillus sp.HSQAY1； Skeletonema costatum； algicidal substance； environmental stability