猪圆环病毒2型灭活苗参考品的研制及定值方法研究
猪圆环病毒2型(Porcine Circovirus Type 2,PCV2)是引起断奶仔猪多系统衰竭综合征(post-weaning multisystemic wasting syndrome,PMWS)等疾病的主要病原,给不少猪场造成了巨大的经济损失.为防控猪圆环病毒病,我国农业部自2010年批准了首个猪圆环病毒疫苗猪圆环病毒2型灭活疫苗(SH株)之后,两年间又先后批准了LG株、DBN-SX07株、WH株和ZJ/C株全病毒灭活疫苗.截至目前,我国共批准了5个毒株的猪圆环病毒灭活疫苗,分别由16家生物制品企业生产.然而各个毒株疫苗的质量标准中的效力检验方法均不相同,许多疫苗仍在用传统的猪检法进行检验,面临着筛猪难且试验费时费力的问题,这势必造成检验监督机构在疫苗检测、监督和规范化管理的实施上难度加大,同时,SH株疫苗效力检验应用的小鼠免疫试验法虽最为简便快速,但缺乏规范化的参考品供应.因此,我们需要尽快研制出猪圆环病毒2型灭活苗参考品,为该类疫苗检验提供一把准确可靠的标尺,规范疫苗的质量.本研究选择质量符合要求的猪圆环病毒2型灭活疫苗(SH株)成品作为该参考品的候选物,无菌分装于西林瓶中制备出该参考品,并对其各项特性值进行了测定,均符合要求.同时,对该参考品进行了仔猪攻毒试验,验证了参考品的保护效力,建立了参考品替代方法与传统方法的相关性,证明了该参考品可以作为PCV2灭活苗质量控制的实物标尺.随后,为了建立更加客观准确的疫苗效力检验体外替代方法,本研究摸索了该参考品进行荧光定量PCR检测时应用的最佳破乳方法,建立了进行猪圆环病毒2型病毒定量检测的荧光定量PCR方法,对其反应条件进行优化和验证,并探索了该方法作为疫苗效力检验替代方法的可行性.结果表明,直接检测疫苗破乳水相中的病毒核酸拷贝数与小鼠免疫试验法测定结果之间具有高度相关性,该方法作为参考品效力检验替代方法具有很强的可行性.此外,针对各毒株疫苗效检方法各不相同的问题,本研究还对该参考品对其它毒株产品应用小鼠免疫试验法进行检验的参考覆盖性进行初步探索,以期将使该参考品成为多种毒株疫苗质量控制的通用标尺,但初步结果表明以当前的方法,该参考品不具有参考覆盖性,其正确应用方法尚待进一步研究和验证.最后,为获得更加准确的定值结果,组织了包括本实验室在内的4家单位进行协作标定,通过对各家试验原始数据的统计分析,将各单位测定的不确定度引入到定值结果中,完成了猪圆环病毒2型灭活苗参考品的最终定值.
- 作者：
- 王晓卉
- 学位授予单位：
- 中国兽医药品监察所
- 专业名称：
- 预防兽医学
- 授予学位：
- 硕士
- 学位年度：
- 2015年
- 导师姓名：
- 王在时
- 中图分类号：
- S852.4
- 关键词：
- 猪圆环病毒2型灭活苗；参考品；仔猪攻毒试验；荧光定量PCR；协作标定
- PCV2 inactivated vaccine； reference standard； swine challenge assay； real-time PCR； collaborative study