吡格列酮对高糖诱导下心肌细胞的抗炎作用及其机制探讨
目的用高糖刺激乳鼠心肌细胞模拟糖尿病诱导的心肌细胞损伤,给予吡格列酮处理观察高糖对心肌细胞炎症因子的影响,以p38MAPK通路的激化情况和NF-κB活性的影响.方法1.乳鼠心肌细胞的分离与培养以及实验分组乳鼠心肌细胞原代分离培养48h后首度换液,再培养24h并进行无血清化6-8h后分成四组:1)正常对照组:使用5.5mmol/L的葡萄糖DMEM培养基作为对照组进行培养;2)高糖组:使用30mmol/L的葡萄糖DMEM培养基作为高糖组进行培养;3)低剂量组:使用30mmol/L的葡萄糖的DMEM培养基加入终浓度10μmol/L的吡格列酮为低剂量组进行培养;4)高剂量组:使30mmol/L的葡萄糖的DMEM培养基加入终浓度20μmol/L的吡格列酮为高剂量组进行培养,各组细胞均继续培养48h后收集细胞及培养基上清进行指标测定.2.指标检测LDH试剂盒测定培养基中LDH的含量,反应心肌细胞受损程度,ELISA法测定培养基上清中的炎症因子IL-6、TNF-α的含量变化,反应心肌细胞中炎症因子产生的情况,用细胞核蛋白与细胞浆蛋白抽提试剂盒提取胞核蛋白,Western Blot法测定细胞胞核转录因子NF-κB亚基p65的蛋白表达情况,另将收集的细胞提取总蛋白同样用Western Blot法检测p-p38MAPK的蛋白表达情况.结果1.乳酸脱氢酶(LDH)含量的测定结果显示,高糖组细胞培养液中LDH的含量显著上升(p<0.01),说明高糖对心肌细胞产生了损伤作用.细胞给予吡格列酮处理后培养液中LDH的含量显著的下降(p<0.05),说明吡格列酮对高糖诱导下的心肌细胞有保护作用.2.炎症因子IL-6、TNF-α含量的检测结果显示,与正常对照组心肌细胞相比较,高糖组乳鼠心肌细胞的炎症因子IL-6、TNF-α含量均明显升高(p<0.05;p<0.01),提示高糖可引起心肌细胞炎症性损伤;而给予吡格列酮处理后(低剂量组与高剂量组),心肌细胞的炎症因子IL-6含量明显下降(p<0.05),TNF-α的含量也显著减少(p<0.05),表明吡格列酮处理能明显减轻炎症因子的产生.3.转录因子NF-κB活性的测定经检测,与正常组心肌细胞相比较,高糖组心肌细胞胞核NF-κB p65蛋白的表达均明显增高(p<0.01),而给予吡格列酮(低剂量与高剂量)后心肌细胞胞核NF-κB p65蛋白表达均明显减少(p<0.05).4. p38MAPK的激活结果显示,与正常组心肌细胞相比较,高糖组p-p38MAPK蛋白表达明显升高(p<0.01),而经吡格列酮处理后(低剂量组与高剂量组)p-p38MAPK蛋白表达升高明显得以改善(p<0.05;p<0.01).结论1.高糖培养可诱导乳鼠心肌细胞的损伤,伴随炎性因子的产生增加,NF-κB活性增加及p38MAPK通路激活.2.吡格列酮处理高糖环境下培养的乳鼠心肌细胞可使细胞炎性损伤减轻,转录因子NF-κB活性得以改善及p-p38MAPK蛋白表达降低.吡格列酮通过抑制p38MAPK通路的激活及转录因子NF-κB的活性,而减轻高糖引起的乳鼠心肌细胞炎性损伤.
- 作者：
- 胡梅
- 学位授予单位：
- 湖北科技学院
- 专业名称：
- 药学
- 授予学位：
- 硕士
- 学位年度：
- 2015年
- 导师姓名：
- 鲍翠玉；刘扬
- 中图分类号：
- R96
- 关键词：
- 高糖；炎症；心肌细胞；吡格列酮
- High glucose； Inflammation； Myocardial cells； pioglitazone