柚皮素对血管紧张素Ⅱ诱导的心肌肥厚的保护作用研究
目的:探讨柚皮素(Naringerin, Nar)对血管紧张素Ⅱ(AngiotensinⅡ,AngⅡ)诱导的C57BL/6J雄性小鼠在体心肌肥厚和H9C2心肌细胞肥大的保护作用,并初步探讨其可能的作用机制.方法:体外培养的H9c2心肌细胞,采用AngⅡ(10-7mol/L)来诱导心肌细胞肥大模型.观察柚皮素对AngⅡ诱导的H9c2心肌细胞肥大的影响.培养的H9c2心肌细胞分为四组:对照组、AngⅡ组、Nar(75μM)+AngⅡ组和Nar (75μM)组.其中Nar+AngⅡ组和Nar组给予Nar预处理60min,随后加入Ang Ⅱ(10-7mol/L)于无血清条件下继续培养24h.CCK-8法检测心肌细胞的活力;F-actin免疫荧光染色观察心肌细胞的大小并计算细胞的表面积;荧光实时定量PCR检测心肌细胞肥大标记性基因心房利钠肽(Atrial natriuretic peptide, ANP)和脑钠肽(Brainnatriuretic peptide, BNP) mRNA的表达;H2DCFH-DA法检测细胞内ROS的生成;Western-blot检测相关信号通路p-AMPK、Nox4、p-Erk蛋白表达.以AngⅡ(1.6mg/kg/d)连续腹腔注射3周诱导在体小鼠心肌肥厚模型.32只雄性C57BL/6J小鼠随机分为四组:对照组、Nar组、AngⅡ组和Nar+AngⅡ组.Nar组和Nar+AngⅡ组腹腔注射Nar (50mg/kg/d),每天给药一次,连续3周.对照组和AngⅡ组给予等体积的生理盐水.实验结束后处死动物,心脏外观拍片粗略估计心脏形态,以初体重(Initial body weight, IBW)和终体重(Final body weight,FBW)、心重(heart weight, HW)及心重与体重之比(HW/BW)定量心肌肥厚的程度;苏木素-伊红染色观察心肌细胞形态;黄嘌呤氧化酶法测定心肌组织超氧化物歧化酶(Superoxide Dismutase, SOD);硫代巴比妥酸法测定丙二醛(Malondialdehyde,MDA)的水平;全自动生化仪测定心肌酶乳酸脱氢酶(Lactic Dehydrogenase, LDH)和肌酸激酶(Creatine Kinase, CK)的活性.结果:柚皮素(12.5,25,50,75μM)对体外培养的H9c2心肌细胞无明显毒副作用.与对照组相比,AngⅡ可明显增加心肌细胞表面积(P<0.05),上调细胞肥大标志性基因ANP和BNP mRNA的表达(P<0.05).荧光显微镜下观察AngⅡ组ROS水平显著多于对照组.与AngⅡ组比较,柚皮素可以明显拮抗AngⅡ诱导的心肌细胞肥大(P<0.05),减少细胞内ROS的生成(P<0.05);降低ANP和BNPmRNA以及p-Erk和Nox4蛋白的表达,增加AMPK磷酸化.较对照组相比,在体AngⅡ处理小鼠左室心肌细胞横径和心室质量指数显著增大(P<0.05)、心肌纤维结构紊乱;心肌酶乳酸脱氢酶(LDH)、肌酸激酶(CK)活性,MDA含量显著升高(P<0.01);SOD活性明显降低(P<0.01).较AngⅡ组相比,Nar可显著改善AngⅡ诱导的心肌细胞结构紊乱;降低心肌细胞横径和心室质量指数(P<0.05);增加心肌组织SOD活性(P<0.05),减轻心肌酶LDH、CK释放和MDA含量(P<0.01).结论:柚皮素对AngⅡ诱导的心肌肥厚具有保护作用,且此保护作用可能与柚皮素激活AMPK,进而影响Nox4的蛋白表达和ROS的生成有关.
- 作者：
- 郑玲
- 学位授予单位：
- 湖北科技学院
- 专业名称：
- 药学
- 授予学位：
- 硕士
- 学位年度：
- 2015年
- 导师姓名：
- 欧阳昌汉；张卫
- 中图分类号：
- R285.5
- 关键词：
- 柚皮素；血管紧张素Ⅱ；心肌肥厚；NADPH氧化酶4；腺苷酸活化蛋白激酶
- Naringenin； AngiotensinⅡ； Myocardial hypertrophy； NADPHoxidase4； Adenosine5'-monophosphate (AMP)-activated protein kinase