雪菊黄酮类化合物的提取、分离鉴定及其活性研究
新疆雪菊(Chrysanthemum)学名金鸡菊C. drummondii Torr. et Gray),又名"高寒香菊",是菊科(Compositae)属一年生干燥头状花序(Ctinctoria)同属近缘草本植物.维吾尔语称之为"古里恰依"Gulqai.早在元代时就有新疆雪菊作为杞菊地黄丸组成部分用于糖尿病的治疗的相关报道.雪菊是药食两用植物,研究新疆雪菊对新疆药用资源的开发具有重要的意义.本实验以新疆雪菊含有黄酮为研究对象,采用超声辅助提取其总黄酮,结合响应面法优化雪菊黄酮的提取工艺.试验采用常压硅胶柱层析法分离黄酮类化合物,并分别对总黄酮和单体进行体内外的抗氧化、降血糖和抑菌活性的等研究,目的在于进行雪菊活性成分(单体)的筛选.(1)试验采用化学预试验法对雪菊中所含化学成份进行初步分析.结果发现:雪菊中可能含有以下物质:黄酮化合物如异黄酮类、二氢黄酮类、二氢黄酮醇类、5-羟基黄酮和2'-羟基查尔酮及邻二酚羟基等;蒽醌类可能为羟基蒽醌类;其它种类如生物碱、皂甙、糖类、酚类、香豆素、萜类和蛋白质及有机酸等.试验测得雪菊花序、茎、叶中总黄酮含量分别为:花序21.95%>茎16.29%>叶10.53%,依据试验结果表明雪菊的花序部位中黄酮类化合物含量最高.因此,雪菊花序被选作下一步实验材料.(2)雪菊总黄酮提取工艺优化:以芦丁标准品为对照品,运用紫外分光光度法测定雪菊总黄酮的含量利用超声辅助提取,通过单因素响应面法优化雪菊黄酮提取工艺,从而确定最优提取参数.得出的最佳工艺条件为:乙醇浓度80%、液料比1:20g/mL、提取时间为30min、超声功率50W.在此条件下,总黄酮提取率为23.81mg/mL.(3)雪菊总黄酮化合物的纯化、分离及结构鉴定:经AB-8大孔树脂纯化,硅胶柱色谱法分离,得到1个纯品-雪菊XJ-1,为首次从雪菊分离得到.综合薄层层析法、高效液相色谱质谱法和核磁共振法对其进行结构鉴定,雪菊XJ-1属于金鸡查尔酮(英文:Okanin).(4)体内、外抗氧化试验.实验小鼠为研究对象及清除ABTS+、O-2·和·OH及DPPH·的清除的能力大小来评价雪菊黄酮体内、外抗氧化能力.比较了雪菊中的粗品黄酮、经不同溶剂萃取后的黄酮和雪菊黄酮XJ-1的抗氧化能力,并评价其抗氧化性能.体外试验结果表明:雪菊黄酮XJ-1清除O2-·的试验结果:XJ-1>VC>乙酸乙酯相物>正丁醇相物>氯仿相物>水相物>粗品黄酮;ABTS+试验结果:XJ-1>乙酸乙酯相物>正丁醇相物>VC>氯仿相物>水相物>粗品黄酮;·OH试验结果:XJ-1>乙酸乙酯相物>VC>正丁醇相物>氯仿相物>水相物>粗品黄酮.DPPH·试验结果:XJ-1>乙酸乙酯相物>正丁醇相物>VC>氯仿相物>水相物>粗品黄酮,总之,体外试验结果表明雪菊黄酮XJ-1的抗氧化能力强于VC.体内试验结果表明:XJ-1>雪菊黄酮高量组>VE组>雪菊黄酮中量组>雪菊黄酮低量组.(5)黄酮降血糖及抑菌作用:实验结果表明雪菊黄酮XJ-1的总降血糖能力为50mg/Kg.此外,本试验比较了雪菊中总黄酮和雪菊黄酮XJ-1对表皮葡萄球菌的抑菌作用,实验结果表明雪菊黄酮XJ-1对表皮葡萄球菌具有很强的抑菌效果,而总黄酮抑菌效果不明显.
- 作者：
- 贺翠
- 学位授予单位：
- 塔里木大学
- 专业名称：
- 生物化学与分子生物学
- 授予学位：
- 硕士
- 学位年度：
- 2014年
- 导师姓名：
- 吴瑛
- 中图分类号：
- R284；R285
- 关键词：
- 雪菊；黄酮；抗氧化；降血糖；抑菌
- Snow Chrysanthemum； Flavonoids； Antioxidant； Hpyerglycemic； Bacteriostat