口蹄疫灭活疫苗总蛋白含量测定方法的研究与标化
Study and Standardization on Methods of Total Protein Content Test of Foot-and-mouth Disease Inactivated Vaccine
在实际生产中疫苗纯度影响感染与免疫鉴别诊断,也与疫苗副反应有关,是影响疫苗应用的重要因素之一,也是目前兽用口蹄疫疫苗质量控制中的关键点.如何改进生产工艺,提高疫苗中有效抗原(146S)含量,降低口蹄疫病毒非结构蛋白等杂蛋白含量,生产出高效优质口蹄疫灭活疫苗是国内口蹄疫疫苗生产技术革新的首要目标.目前我国对口蹄疫灭活疫苗成品检验各项中尚没有关于纯度检验的要求.口蹄疫灭活疫苗中蛋白质含量的测定,可间接反映疫苗纯度,因此,建立一种准确、高效、简捷的测定口蹄疫灭活疫苗蛋白质含量的方法是十分必要的.本研究通过比较凯氏定氮法,改良Lowry法和考马斯亮蓝法三种较常见的蛋白质含量测定方法,筛选出一种能够准确、高效、简捷地测定口蹄疫灭活疫苗蛋白质含量的方法;以已知浓度的标准白蛋白代替口蹄疫灭活疫苗中灭活抗原成分,来模拟半成品灭活抗原及成品疫苗对其操作程序进行优化;将牛血清白蛋白粉末配制成不同浓度溶液,验证其灵敏度,并采用优化的操作程序测定不同生产厂家送检疫苗样品蛋白质含量,验证其重复性和重现性.结果表明,改良Lowry法能较真实的反映口蹄疫灭活疫苗中蛋白质含量,与凯氏定氮法相比,此方法操作简单,工作效率高,而且低耗;该方法的最优操作程序为丙酮直接沉淀疫苗样品,重悬后测定蛋白质含量;本研究采用的改良Lowry法蛋白质含量测定试剂盒的实际检测范围为50~2500μg/mL;并且优化的操作程序重复性和重现性均很好;测定的不同生产厂家送检的37批次疫苗样品蛋白质含量显示,不同生产厂家不同疫苗样品蛋白质含量差异显著,但是94.6%的疫苗样品蛋白质含量均位于50~2500μg/mL范围内,测定过程无需对样品进行稀释或浓缩处理.本研究确立的改良Lowry法测定口蹄疫灭活疫苗蛋白质含量方法可以应用于当前口蹄疫灭活疫苗蛋白质含量检测,为口蹄疫灭活疫苗蛋白质含量检测方法的遴选和标准化提供了实验依据.已成为农业部推荐口蹄疫灭活疫苗蛋白质含量测定方法.
- 作者：
- 马丽
- 学位授予单位：
- 中国兽医药品监察所
- 专业名称：
- 预防兽医学
- 授予学位：
- 硕士
- 学位年度：
- 2014年
- 导师姓名：
- 赵启祖
- 中图分类号：
- S855.3
- 关键词：
- 口蹄疫灭活疫苗；蛋白质含量测定；改良Lowry法；丙酮沉淀法
- FMD inactivated vaccine；Protein quantitation；Modified Lowry protein assay；Precipitation by acetone