丹参酮包合物制备及体外抑菌活性研究
Study on Thepreparation of Total Tanshinones-β-cyclodextrin and the Antimicrobial Activity in Vitro
本试验主要研究并确定了丹参总酮类物质最适宜的提取、分离纯化的方法.并将制得的提取物以羟丙基-β环糊精为辅料,制备成丹参总酮的包合物溶液.初步探讨了丹参总酮的包合物溶液在体外对奶牛乳房炎的几种常见致病菌的抑菌活性.为开发治疗奶牛乳房炎的丹参类制剂提供一定的理论基础.1、分别考察乙醇加热回流提取、超声波提取以及冷浸提取三种方法的提取效果.以提取率为主要指标,综合考虑生产成本及生产周期,从而确定最适宜的提取方案.2、对比大孔树脂吸附纯化、传统的醇提水沉纯化以及药典规定的水洗纯化三种纯化方法,以纯化的总酮提取物含量以及最终产率为指标,考察并确定最佳的纯化方案.3、采用饱和水溶液法、不饱和水溶液法分别制备丹参总酮提取物包合溶液.以包合物溶液中有效成分的含量为指标,考察包合物制备的温度,时间,物料比以及加热方式.确定最优的总酮包合物制备方法.4、选用大肠杆菌、金黄色葡萄球菌等几种常见奶牛乳房炎的致病菌作为试验菌.平板菌落计数法筛选1*108cfu/mL菌液涂板,以杯碟法测定体外抑菌活性,琼脂稀释法测定最小抑菌浓度.初步探讨包合物溶液对几种致病菌的体外抑菌活性.最终确定以乙醇回流加热法提取丹参总酮,适合目前多数的兽药生产厂的设备条件.生产成本低且生产周期短.平均提取率在90%(丹参酮ⅡA为指标).以水洗纯化法纯化提取物,纯化的提取物中,丹参酮ⅡA含量在13.8%左右,隐丹参酮含量在5.2%左右.且纯化前后总酮损失小,约为23%.同时纯化操作简单,耗时短.符合工业化生产的要求.采用冷热交替的加热方式,以不饱和水溶液法制备总酮提取物的包合物溶液.制备的包合物溶液中有效成分含量约3mg/mL.高于其他包合方法.包合物对金黄色葡萄球菌、枯草芽孢杆菌和停乳链球菌的抑制效果显著.MIC值为金黄色葡萄球菌(丹参酮ⅡA0.73mg/L,隐丹参酮2.51mg/L),枯草芽孢杆菌和停乳链球菌相同(丹参酮ⅡA1.18mg/L,隐丹参酮4.02mg/L).同时,改善了丹参总酮提取物难溶于水、吸收差的特性,提高了其生物利用度.可进行生物制剂研究及配合临床抗生素使用,具有较高的应用前景.
- 作者：
- 强喆
- 学位授予单位：
- 甘肃农业大学
- 专业名称：
- 基础兽医学
- 授予学位：
- 硕士
- 学位年度：
- 2013年
- 导师姓名：
- 李晓明；梁剑平
- 中图分类号：
- S567.53；TQ465
- 关键词：
- 丹参总酮；分离纯化；包合物；抑菌活性
- Total tanshinones；Separation and purification；Inclusion complex；Antimicrobial activity