豆状带绦虫抗原特性分析与TPO18重组蛋白的保护性分析
Analysis of Antigenic Characteristics of Taenia Pisiformis and Protective Efficacy of TPO18Recombinant Protein
采集自然感染的兔豆状囊尾蚴,人工感染犬,收集孕卵节片,以不同数量虫卵感染家兔和小鼠,定期采血,用间接ELISA法检测家兔和小鼠的抗体消长.结果显示:家兔自感染后第8d抗体水平开始升高,第43d开始逐渐下降,直至第63d抗体仍呈较高的阳性水平.小鼠自感染后第8d抗体水平开始升高,第38d开始逐渐下降,直至第49d抗体仍呈较高的阳性水平.结果表明,在本试验所设条件下,抗体水平随感染数量的增加而升高;感染剂量最大组抗体水平上升得最快,且抗体水平高于其他攻虫组.对豆状带绦虫不同发育阶段虫体、猪囊尾蚴囊液、羊脑多头蚴及其囊液进行SDS-PAGE,分离出4~8条主要蛋白区带,分子量范围为30.4~114.9ku.以第50d感染家兔血清对13种虫体抗原作Western-blot分析,结果显示,13种虫体抗原在59.4ku处均能被兔抗豆状囊尾蚴阳性血清识别.羊脑多头蚴与豆状囊尾蚴特异性抗原极相似,共有4条相似带,表明它们之间存在着交叉反应.根据带科其他种属绦虫18ku基因的保守区设计引物,以豆状带绦虫六钩蚴RNA为模板,进行RT-PCR,扩增出TPO18完整开放阅读框,结果表明,TPO18开放阅读框含有339个核苷酸,编码112个氨基酸.将TPO18基因克隆到pGEX-4T-1原核表达载体上,构建重组质粒pGEX-TPO18,优化表达条件后大量表达.将纯化后的重组蛋白分别加弗氏佐剂、206佐剂、氢氧化铝佐剂免疫家兔,每次50μg/只,共免疫3次,获得抗TPO18重组蛋白高免血清,该血清可识别豆状带绦虫可溶性蛋白中约38ku的条带.末次免疫后34d每只家兔感染1500个虫卵,感染58d后扑杀并计算各免疫组减囊率.经ELISA检测,末次免疫后抗体水平达到最高,显著高于对照组.经口感染虫卵后抗体仍保持一定水平.三组免疫组减囊率分别为79.13%、65.66%和50.43%.结果表明,弗氏佐剂和206佐剂都能产生较好的免疫保护,氢氧化铝佐剂的免疫效果较差,试验结果为进一步研究兔豆状囊尾蚴病的高效疫苗奠定了基础.
- 作者：
- 韩进欢
- 学位授予单位：
- 甘肃农业大学
- 专业名称：
- 预防兽医学
- 授予学位：
- 硕士
- 学位年度：
- 2013年
- 导师姓名：
- 孙晓林
- 中图分类号：
- S852.734
- 关键词：
- 豆状带绦虫；TPO18基因；原核表达；免疫保护性分析
- Taenia pisiformis；TPO18gene；prokaryotic expression；protective efficacy