半套式PCR技术检测土壤中弓形虫的研究
Study on the Detection of Toxoplasma Gondii from Soil by Hemi-nested PCR
刚地弓形虫(Toxoplasma gondii)是一种宿主广泛的寄生性原虫,能感染包括人类在内的多种温血动物,其引起的弓形虫病(toxoplasmosis)危害严重,对人类健康和畜牧业生产构成很大威胁.弓形虫病有多种传播途径,通过接触土壤而食入弓形虫卵囊是获得性感染的主要方式之一.卵囊随猫粪排入环境后,随着雨水冲刷和渗透作用在土壤中散播,进一步污染水源,成为弓形虫病的重要传染源.建立土壤中弓形虫检测方法并采集土样进行检测,了解土壤中弓形虫的分布情况,可以有效预防土源性弓形虫病的传播.从土壤中分离病原体后镜检或接种小鼠是以病原学为基础的检测方法,随着分子生物学的发展,以PCR为基础的基因扩增技术因特异性强、敏感性高、检测速度快等优点已广泛应用于土壤中弓形虫的检测.本研究以弓形虫529bp重复序列为靶基因,设计特异性引物,建立了土壤中弓形虫半套式PCR检测方法.该方法操作简单、重复性好,每克土壤中最低可检测到2个弓形虫卵囊,且与犬新孢子虫、牛微小隐孢子虫、鸡贝氏隐孢子虫、莫氏巴贝斯虫、大巴贝斯虫、卵形巴贝斯虫、双芽巴贝斯虫、中华泰勒虫、牛巴贝斯虫、环形泰勒虫、牛链球菌、猪链球菌、蒙氏肠球菌无交叉反应.对该方法检出的阳性土样进行测序,结果显示扩增序列与靶基因序列相似性均在97%以上.利用建立的半套式PCR检测方法,对采自兰州城区、北京地区猪场以及青海省的土样进行检测,阳性率分别为15.63%、10.61%和9.17%.本研究建立的土壤中弓形虫检测方法特异性强、敏感性高且检测速度快,适合大规模的土壤检测,为调查弓形虫卵囊在土壤中的分布情况、预防和控制土原性弓形虫病的传播提供了技术支持.
- 作者：
- 孟鹏
- 学位授予单位：
- 甘肃农业大学
- 专业名称：
- 预防兽医学
- 授予学位：
- 硕士
- 学位年度：
- 2013年
- 导师姓名：
- 张德林；赵晋军
- 中图分类号：
- S855.9
- 关键词：
- 土壤；529bp序列；弓形虫卵囊；半套式PCR
- soil；529bp sequence；Toxoplasma gondii oocyst；hemi-nested PCR