褪黑素受体MT1在双峰驼下丘脑胶质细胞中的表达及cAMP信号转导
The Expression of Melatonin Receptor MT1in Hypothalamus Glial Cell of Bactrian Camel and Camp Signal Transduction
褪黑素对动物繁殖活动的季节性具有重要的调节作用,但有关繁殖季节双峰驼下丘脑胶质细胞中褪黑素MT1受体是否表达以及信号转导的研究未见报道.本实验采集1112月双峰驼下丘脑组织,采用酶消化细胞培养法、分子生物学方法、G蛋白信号转导通路阻断法及酶联免疫吸附法等研究了双峰驼下丘脑胶质细胞中褪黑素受体MT1的表达及褪黑素参与的信号转导通路,为揭示褪黑素在哺乳动物生殖轴系中的作用提供一定的基础研究.其研究结果如下:(1)应用酶消化法,成功培养了双峰驼下丘脑胶质细胞,通过细胞传代,反复冻存和复苏,实现了细胞系的长期保存.经过多次传代,获得了大量的双峰驼下丘脑胶质细胞.(2)应用RT-PCR方法从双峰驼下丘脑胶质细胞中成功克隆了褪黑素受体MT1(452bp)部分基因,并与多种哺乳动物的MT1基因序列进行比对,发现本实验克隆的MT1基因片段与牛的MT1基因序列相似性最高(87%);跟牛、羊、马、猪等处于同一个系统进化树分支,说明双峰驼的MT1基因与牛、羊、马等的MT1基因遗传距离较近,具有一定的进化同源性.(3)褪黑素可引起下丘脑胶质细胞cAMP的降低,随着剂量的逐渐增加,下降趋势逐渐减弱;PTX+褪黑素组和PTX组效果相似,对cAMP的生成量的影响差异不显著,FSK可极显著地引起cAMP的生成量的增加,FSK+褪黑素组细胞内cAMP的累积低于FSK组,差异显著.表明不同的褪黑素处理可改变双峰驼下丘脑胶质细胞内cAMP的含量,褪黑素与其受体结合后可改变双峰驼下丘脑胶质细胞中cAMP的累积,对双峰驼下丘脑胶质细胞的调控与PTX敏感的G蛋白依赖的抑制性Gi和刺激性Gs通路有关.结论:从双峰驼下丘脑胶质细胞成功克隆了MT1基因,探索了下丘脑胶质细胞中褪黑素参与的cAMP信号转导通路,为褪黑素调控动物季节性繁殖及褪黑素的作用机理提供了新的研究切入点.
- 作者：
- 张连梅
- 学位授予单位：
- 甘肃农业大学
- 专业名称：
- 发育生物学
- 授予学位：
- 硕士
- 学位年度：
- 2013年
- 导师姓名：
- 张勇
- 中图分类号：
- S824
- 关键词：
- 双峰驼；下丘脑；胶质细胞；MT1；信号传导
- Bactrian camel；hypothalamus；Glial cell；MT1；Signal transduction
- 基金项目：
- 国家自然科学